蛋白质技术手册 > 汪家政范明主编 .3-62 图书馆 科学出版社
刖 生命科学是21世纪的带头学科,在现代生命科学最前沿的研 究领域中,以研究人类基因组结构和功能为主的“蛋白质组计划 已经成为分子生物学的重要课题,并带动了整个生命科学的发展 随着科学不断发展,研究手段日新月异,我们从实践中体会到,在 蛋白质研究的日常工作中,一本关于蛋白质研究方法的工具书会 发挥很大的作用。1990年前后出版的《分子克隆实验指南)使核 酸操作技术实现了标准化,推动了“基因组计划”的发展和实现。 由于蛋白质结构和性质的复杂与多样性,难以归纳出般性的分 析操作规程。因而缺少有关蛋白质技术方面的工具书。我们参考 了“ Protein methods”"(1996年第二版)一书的内容和编写方法,结 合自己多年研究实践的经验和体会,编写了这本(蛋白质技术手 册》。内容包括蛋白质的准备、提取、溶解浓度测定、浓缩、电泳、 层析、免疫印迹、晶体培养和一级结构测定等,共14章。这是一本 适用于各种蛋白质分析和操作的实验指南。为实验者提供实用、有 效的蛋白质操作信息,使实验能够直接、快捷地进行,是我们编写 这本书的心愿。书中插图的制作由北京医科大学人民跃院李钧完 成 本书在出版时得到军事医学科学院基础医学研究所和院科技 部的比版经费资助
目录 第一章蛋白质分高的准备 甲即曲甲D中中 1.I引 1.2缓冲液 1.2.1缓冲液的性质 1.2.2缓冲液配制…… 1.2.3浓度对缓冲液pH值的影响…5 1.2.4某些缓冲液使用时的注意事项 6 1.2.5防止缓冲液受污染………………7 1.2.6水的纯度… 1.3盐、金属离子和螯合剂… 1.3.1离子强度… 1.3.2二价阳离子……… 7 1.3.3螯合剂……………8 1.4还原剂… 8 1.4.1总则 8 1.4.2特殊情况 甲p甲+ L.5去垢剂 9 1.5.!去垢剂的分类… 1.5.2蛋白质溶解的初始操作步骤………3 1.6蛋白质的环境因素……… 14 1.6.1表面效应…… ………14 1.6.2温度… 14 ↓.6.3储存…… 5 1.7蛋白酶抑制剂 16 1.7.1常用抑制剂… 1.7.2蛋白酶抑制剂混合使用………… 18 第二章蛋白质的提取和溶解… ………20
2.1引言 20 2.2细胞破碎和蛋白质溶解……… …21 2.2.1匀浆… 21 2.2.2超声… 2.2.3高压匀浆 25 2.2.4研磨 2.2.5(高速)珠磨……………………27 2.2.6酶溶………………………………27 2.2.7化学滲透… 2.2.8其他方法………………………29 2.3包涵体蛋白质的溶解 2.3.1包涵体蛋白质的溶解及复性… 2.3.2防止包涵体形成 33 第三章蛋白质浓度测定… 3.1280纳米(A280)光吸收法…… 3.1.1提要… 888 3.1.2设备…………… 3.1.3试剂 ……………………………39 3.1.4操作步骤……… ……………39 3.1.5注意事项 3.2 Bradford检测法 ∴…………………………42 3.2.1提要……… 42 3.2.2设备………………… 3,2.3试剂 b甲 ………43 3.2.4操作步骤… 43 注意事项 ……46 3.31owry检测法… ……………………47 3.3.1提要…… ……………………47 3.3.2设备 3.3.3试剂 48
3.3.4操作步骤………………………………… 3.3.5注意事项 …………50 3.4二喹啉甲酸(BCA)检测法 3.4.1提要 5 3.4.2设备… ……52 3.4.3试剂 52 3.4.4操作步骤……………………………52 3.4.5注意事项…………………… 3.5斑点滤膜结合法…………… D省《鲁 3.5.1概述 ……………54 3.5.2操作步骤 ………54 3.6干扰物质表 55 第四章蛋白质溶液的浓缩……… 4.1分析方法… 4.1.l三氯醋酸沉淀法……… 4.1.2丙醐沉淀法………………… 4.1.3免疫沉淀法 …62 4.2制备方法…………… 4.2.I硫酸铵沉淀法…… 5 4.2.2有机溶剂沉淀法 …68 4.2.3聚乙二醇沉淀法… 4.2.4超滤法… 70 4.2.5透析法 72 4.2.6离子交换层析和冷冻干燥法简述 74 第五章变性条件下的凝胶电泳 甲·+,甲中·甲非甲 S.tSI)s-聚丙烯酰胺凝胶电泳……… 5.1.l原理 5.1.2设备 5.1.3制胶 79 5.1.4制备样品和上样……… ………87