3阳性克隆的分析与鉴定: 从基因库中筛选出阳性克隆→分析、鉴定→得到 目的基因。 (1).限制性酶图谱: 构建阳性克隆的限制性酶图谱→根据同源性分析, 了解阳性克隆片段的酶切位点及相对位置→用于进一步 亚克隆或同已知的其它序列比较
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CK NoTI SalI NoTI.sal 图:一个15 kb dna片段 的限制性酶图谱构建方法。 不同DNA用限制性酶酶切, 根据其产生的多型性,即限制 性酶片段长度的多型性→来B Ba1 分析DNA水平的变异程度, Sad t hul 1 1油02脚 以RFLP作为分子标记进行基因 制性酶图语的构建 组图谱分析。 所切片的赴电为然果 浓制性射特排灌式,仅据w11 升切的过果,可有和种排方式,如 精合种排分斩。限是确的 12/95
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(2),核酸分子杂交: ①. Southern杂交分析:由英国 C Southen(975发明,将意脂糖中·三三 的DNA转移到尼龙膜→进行DNA 分子杂交分析的方法。 电冰 筛选基因库得到阳性克隆→将 限制性酶酶切与 Southern杂交结合 →绘制限制性酶图谱。 °三 eewoneue mneg utte 射包 部需° 影与份计 13/95
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② Norther杂交分析:与 Northem杂交的原理和程序相同 用于分析克隆的基因在某一细胞或组织的转录水平, 检测mRN的存在。 feme lye arose go and Aten blo( GA/DHpvabed of poly A*meNA Mohw hme wt ENA Kee arius 14/95
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③. Western杂交分析: 用于蛋白质的分析。 c soon 放射自影 Anio on Prra Firo cten 是 nerdy papas bourd e 15/95
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