人类基因组项目研究中,利用流动细胞分离(ow cytometry)技术将人类染色体分开构建单个染色体基因库 加速人类基因组作图和分析。 分离染色体进行 验证 45 0,13 流式细胞分离原理丿 6/95
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酵母菌: 利用改良的脉冲电泳方法 pulsed field gel electro phoresis,FGE),将酵母菌16根染色体依据其分子量 大小分开后,用于构建染色体库,在基因组的分析中 发挥作用。 酵母菌 7195
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③.cDN4: p RNA为模板→反转录酶4 11 合成互补DNA→构建基因库 真核生物mRNA3端有一段 2开始合成DNA 多聚A尾端→双链DNA分子经 ↓3 CDNA-RNA杂合双链 两端补齐→以带限制性酶切点 4cDNA3发夹结构 的人工接头连接+酶切后与载 台成第二链 体(通常是噬菌体连接→制备 DNA库。 双链CDNA DNA库与核DNA库不同: M会成示象图 cDNA库仅具有细胞或组织 poy7引物和冷我m分子复性:2在T引 导下开始形歧互和剂]3完整一每(N合 内表达基因的mRNA序列→仅包 威,那成心O合创:4CN描左3难围发 吴构三发盐构们导会成二用Rwe理 括基因组的部分基因序列。 6将单统降解,得到双M 8/95
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2.筛选基因库: 根据待选基因相关信息→确定筛选方法和条件 今从基因库中筛选、分离基因。 多数方法是利用一段核苷酸序列①NA、cDNA或 寡聚核苷酸)或抗体作探针( Probe,用放射性同位素或 非放射性同位素标记探针→筛选基因库。 9195
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筛库过程: M treelawn 将噬菌体感染形成的噬菌 L 斑印影在硝酸纤维膜上变性→ 带有目的基因的放射性DN或m DNA作探针进行杂交放射性 自显影→杂交信号(黑点)对 应的噬菌斑即为阳性克隆。 10/95
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