四、基因的分离与鉴定 一般而言,一个基因→是编码一条多肽链的一个DNA 片段,包括启动子、终止子及内含子等。 在DNA重组技术出现之前,由于DNA 分子量大而结构单一,DNA是细胞中最难 分析的大分子。 DNA重组技术发展成功之后,DNA已 成为细胞中最易操作分析的大分子
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DNA的体外重组: 1体外通过限制性内切酶二m 的修剪和DNA连接酶的 连接; 2目标DNA分子+载体 DNA,共价连接; P获得重组DNA分子 m 2/95
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、从基因库中分离基因: 1.基因库( library) 是一组DNA和cDNA序 列克隆的集合体,从基因库999999 中分离基因,首先要构建 t 基因库。 根据克隆核酸序列、来 源,基因库可分为: 核基因库、染色体库、 cDNA库、线粒体库等。 构建基因文库 3/95
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①.核基因库: 核基因库 genomic library):将某生物全部基因组DNA 酶切后与载体连接构建而成。 构建文库可采用不同的载体: 质粒载体:重组质粒导入感受态细胞啼收集菌落。 噬菌体或柯斯质粒( cosmid载体:将重组DNA包装进 噬菌体感染细菌啼收集噬菌斑 BAC(细菌人工染色体或YAC酵母人工染色体)体: 重组人工染色体中导入宿主细胞啼收集细胞。 4/95
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②.染色体基因库: 将染色体用来构建基因库啼可选择特异基因和分析 染色体结构和组织。 如果蝇的多线 染色体:对染色体 进行微切割,可以 构建染色体区段的 基因文库。 5195
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