同裂酶(isoschizomers) 通常将能切割同一靶序列的限制性核酸内切 酶称为同裂酶。同裂酶产生同样的切割,形 成同样的末端。 如HpaI和Mp。.dCGG-3 3'.-GGCC-.-5
同裂酶(isoschizomers) 通常将能切割同一靶序列的限制性核酸内切 酶称为同裂酶。同裂酶产生同样的切割,形 成同样的末端。 如Hpa II和Msp I。 5'----C CGG----3' 3'----GGC C----5
限制性内切酶的次级活性一星号活性 (star activity >在某些条件下,一种特异性识别顺序的限制 性内切酶在酶切同一种DNA片段时会产生新 的酶切位点而得到不同的酶解片段的酶活性 则称为星号活性
限制性内切酶的次级活性—星号活性 (star activity) 在某些条件下,一种特异性识别顺序的限制 性内切酶在酶切同一种DNA片段时会产生新 的酶切位点而得到不同的酶解片段的酶活性 则称为星号活性
限制性内切酶的次级活性一星号活性 (star activity) >实例:EcoR I在正常情况下,识别6个核苷酸 顺序GAATTC,但在异常情况下,可识别4个 核苷酸的顺序AATT,酶切产物能电泳鉴定出 现的DNA条带数比正常情况下有增加
限制性内切酶的次级活性—星号活性 (star activity) 实例:EcoR I在正常情况下,识别6个核苷酸 顺序GAATTC,但在异常情况下,可识别4个 核苷酸的顺序AATT,酶切产物能电泳鉴定出 现的DNA条带数比正常情况下有增加
产生星号活性的因素: >甘油浓度过高。在限制性内切酶的浓度与 DNA数量的比值为50U/μgDNA时,甘油的含 量为7.5%(vw)便能引起星号活性。当应用 酶浓度与DNA数量的比值为10U/μgDNA时, 甘油含量高于15%(vw)或以上也会引起星 号反应。 >离子强度不适合
产生星号活性的因素: 甘油浓度过高。在限制性内切酶的浓度与 DNA数量的比值为50 U/μg DNA时,甘油的含 量为7.5%(v/v)便能引起星号活性。当应用 酶浓度与DNA数量的比值为10 U/μg DNA时, 甘油含量高于15%(v/v)或以上也会引起星 号反应。 离子强度不适合
产生星号活性的因素: >阳性离子的变化。如将反应体系中Mg2+改为 Mn+时可促使EcoR I、Hind III产生星号反应。 溶液中pH的变化。如用EcoR I酶解时,反应 体系中的pH值由pH2.5升高到pH8.5时也会出 现星号反应。 >有机溶剂残留的影响
产生星号活性的因素: 阳性离子的变化。如将反应体系中Mg2+改为 Mn2+时可促使EcoR I、Hind III产生星号反应。 溶液中pH的变化。如用EcoR I酶解时,反应 体系中的pH值由pH2.5升高到pH8.5时也会出 现星号反应。 有机溶剂残留的影响