DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶|大片段( Klenow) Klenow酶的基本用途: 补平由核酸内切酶产生的5“粘性末端 DNA片段的同位素末端标记 CDNA第二链的合成 ●双脱氧末端终止法测定DNA序列
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶 I 大片段（ Klenow ） Klenow酶的基本用途： 补平由核酸内切酶产生的5‘粘性末端 DNA片段的同位素末端标记 cDNA第二链的合成 双脱氧末端终止法测定DNA序列
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶|大片段( Klenow) Klenow酶的基本用途:补平由核酸内切酶产生的5“粘性末端 G-C-T-G-OH P-A-A-T--C-G-A-G 3. C-GAC-T-TA-A-P OH-G-C-T-C 5 Klenow datP dTTP 5G-C-T-G-AAT-T-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G 3.C-GAC-T-T-A-A-P OHTTAA-G-C-T-C 5
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶 I 大片段（ Klenow ） Klenow酶的基本用途：补平由核酸内切酶产生的5‘粘性末端 5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-G-C-T-C … 5’ Klenow dATP dTTP 5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶|大片段( Klenow) Klenow酶的基本用途:DNA片段的同位素末端标记 5‘∴GcTG-0H P-A-A-T-T-C-G-A-G 3.C-GACTTAA OH-G-C-T-C 5 Klenow a-32P-pppda dTTP 5 G-C-T-GAAT-T-OH P-AAT-T-C-G-A-G 3.C-GACTTA A-P OHTTAAG-C-T-C 5
DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶 I 大片段（ Klenow ） Klenow酶的基本用途： DNA片段的同位素末端标记 5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-G-C-T-C … 5’ Klenow a- 32P-pppdA dTTP 5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-P OH-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶 T4-DNA酶的基本特性: 5‘→3“的DNA聚合酶活性和3‘→5“的核酸外切 ●瞿先TP时,可以从任何3-OH端外切 ●在只有一种NTP时,外切至互补核苷酸暴露时停止 在四种dNTP均存在时,聚合活性占主导地位
DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶 T4-DNA酶的基本特性： 在无dNTP时，可以从任何3‘-OH端外切 在只有一种dNTP时，外切至互补核苷酸暴露时停止 在四种dNTP均存在时，聚合活性占主导地位 5‘→3‘的DNA聚合酶活性和3‘→5‘的核酸外切 酶活性
DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶的基本用途:切平由核酸内切酶产生的3粘性末端 5 G-C-T-C--G-C-A-OH P-G-G-A-G 3….cGA-G HO-A-C-G-T-C-C-T-C 5 T4DNA聚合酶 5‘∴.G-cTC-OHP-G-GAG 3….cGA-G HO -C-C-T-C 5 注意:该也能降解双链DNA,只是其活性比单链降解活性低很多
DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶 T4-DNA聚合酶的基本用途：切平由核酸内切酶产生的3’粘性末端 5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-P HO-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’ T4-DNA聚合酶 5‘ … G-C-T-C- OH P-G-G-A-G … 3’ 3‘ … C-G-A-G-P HO -C-C-T-C … 5’ 注意：该酶也能降解双链DNA，只是其活性比单链降解活性低很多