注意事项 基本原则：防止生物分子变性、降解 1. 控制适当的pH 2.控制低温 3。注意提取过程中的溶液环境 4.防止提纯过程中丢失一些辅助因子或亚基
注意事项 基本原则：防止生物分子变性、降解 1．控制适当的pH 2．控制低温 3．注意提取过程中的溶液环境 4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基
宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化 纯化步骤 总蛋白 总活力 比活力 纯化倍数 回收率 (mg) (U) (U/mg蛋白)》 (%) 1、 粗酶液 80 4320 54 1 100 2、乙醇沉淀 29 3585 123 2.27 83 3、醋酸钙沉淀 21 2980 141 2.64 69 4、盐析 4 1771 464 8.52 41 5、丙酮沉淀 1 1166 1104 20.29 27 6、结晶 0.12 130 1072 19.70 3
宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化 纯化步骤 总蛋白 总活力 比活力 纯化倍数 回收率 （mg） （U） （U/mg蛋白） （%） 1、粗酶液 80 4320 54 1 100 2、乙醇沉淀 29 3585 123 2.27 83 3、醋酸钙沉淀 21 2980 141 2.64 69 4、盐析 4 1771 464 8.52 41 5、丙酮沉淀 1 1166 1104 20.29 27 6、结晶 0.12 130 1072 19.70 3
第二节几类重要的生化实验技术 层析技术 二、电泳技术 三、离心技术 四、透析和超过滤
第二节 几类重要的生化实验技术 一、层析技术 二 、电泳技术 三 、离心技术 四 、透析和超过滤
一.层析技术(chromatography) 1.层析技术一般原理 2.层析技术分类 3.常用层析技术及应用
一．层析技术（chromatography） 1．层析技术一般原理 2．层析技术分类 3．常用层析技术及应用
层析技术原理 ○层析技术是一种物理的分离方法。无论何种层析，都是由互不 相溶的两个相组成：一是固定相（固体或吸附在固体上的液体）， 一是流动相（液体或气体）。层析时，利用混合物中各组分理化 性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、溶 解度等)的差异，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动 相从固定相上流过，不同组分以不同速度移动而最终被分离。 ●混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在两相中的 分配情况，一般用分配系数(distribution coefficient,.Ka)来 描述。混合物各组分的分配系数差异越大，越容易分离开。 物质在层析系统中的行为并不直接决定于其K，而取决于它的 有效分配系数K。ft: 某一物质在A相中的总量 K。f某一物质在B相中的总量
层析技术原理 •层析技术是一种物理的分离方法。无论何种层析,都是由互不 相溶的两个相组成:一是固定相(固体或吸附在固体上的液体）， 一是流动相（液体或气体）。层析时，利用混合物中各组分理化 性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、溶 解度等）的差异，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动 相从固定相上流过，不同组分以不同速度移动而最终被分离。 •混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在两相中的 分配情况，一般用分配系数(distribution coefficient,Kd）来 描述。混合物各组分的分配系数差异越大，越容易分离开。 •物质在层析系统中的行为并不直接决定于其Kd，而取决于它的 有效分配系数Keff : Keff = 某一物质在A相中的总量 某一物质在B相中的总量