Separate strands Anneal primers Tag polymerase extends primers (c) Separate strands Anneal primers (d) MIullis开车的时候，瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的 车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA
Mullis开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的 车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA，
Mullis的第一个PCR实验 New stand 000A DNApolymerase Leading template -Single-standed DNA binding proteins Lagging template RNA primer 000000 Parental DNA DNA primase DNA polymerase Okasaki fragment Collaboration of Proteins at the Replication Fork 1983年9月中旬。Muis在反应体系中加入DNA聚合酶后 在37℃一直保温。结果第二天在琼脂糖电泳上没有看到任 何条带。于是他认识到有必要用加热来解链，每次解链后 再加入DNA聚合酶进行反应，依次循环。1983年12月， 他终于看到了被同位素标记的PCR条带
Mullis的第一个PCR实验 ▪ 1983年9月中旬。Mullis在反应体系中加入DNA聚合酶后 在37℃一直保温。结果第二天在琼脂糖电泳上没有看到任 何条带。于是他认识到有必要用加热来解链，每次解链后 再加入DNA聚合酶进行反应，依次循环。1983年12月， 他终于看到了被同位素标记的PCR条带
发展史 1983年春，MulIis发展出PCR的概念； 1983年9月，Mulis/用大肠杆菌DNA聚合酶做了第一个PCR实验， 只用一个循环； 1983年12月，用同位素标记法看到了10个循环后的49bp长度的 第一个PCR片断； 1985年12月20日，Mullis的同事Saiki在Science.上发了一篇论文， 方法中用了PCR技术，导致Mullis的文章到处被拒； 1985年10月25日申请了PC的专利，1987年7月28日批准（专利 号4,683,202)，这回Mullis是第一发明人。 1986年5月，MulIis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开 始学习PCR的方法； 1986年6月，Cetus公司纯化了第一种高温菌DNA聚合酶，Taq DNA polymerase,这是85年春天Mullis建议做的； 1988年，第一台PCR仪问世； 1991年，Hoffman LaRochel以3亿美元的代价从Cetus公司获得全 权开发权
发展史 ▪ 1983年春，Mullis发展出PCR的概念； ▪ 1983年9月，Mullis用大肠杆菌DNA聚合酶做了第一个PCR实验， 只用一个循环； ▪ 1983年12月，用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的 第一个PCR片断； ▪ 1985年12月20日，Mullis的同事Saiki在Science上发了一篇论文， 方法中用了PCR技术，导致Mullis的文章到处被拒； ▪ 1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利 号4,683,202 ），这回Mullis是第一发明人。 ▪ 1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开 始学习PCR的方法； ▪ 1986年6月，Cetus公司纯化了第一种高温菌DNA聚合酶，Taq DNA polymerase，这是85年春天Mullis建议做的； ▪ 1988年，第一台PCR仪问世； ▪ 1991年，Hoffman LaRoche以3亿美元的代价从Cetus公司获得全 权开发权
RESEARCH ARTICLE Enzymatic Amplification of B-Globin The authors are in the Department of Human Genomic Sequences and Restriction Site Genetics,Cetus Corporation,1400 Fifty-Third Street,Emeryville,California 94608.The present Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia address for N.A.is Department of Biological Sci- ences,University of Southern California.Los Ange- 1es90089-0371. Randall K.Saiki.Stephen Scharf,Fred Faloona.Kary B.Mullis Glenn T.Horn,Henry A.Erlich,Norman Arnheim SCIENCE,VOL.230 States Patent 46B3202 *July28,1987 for amplifying nucleic acid sequences Inventors: Iullis:Kary B.(Kensington,CA) Assignee: Cetus Corporation (Emeryville,CA) [+Notice:The portion of the term of this patent subsequent to July 28,2004 has been disclaimed. Appl.No.: 791308 Filed: October 25,1985
PCR不只是一个方法改进 Mullis的上司有句“名言”，“我们要扩增这么 多DNA样品有什么用”； ■到了1991，Cetus公司以3亿美元的转让费将PCR 相关专利转让给瑞士Hoffman LaRoche公司，并 在此后的经营中又获得了数亿美元的分红； Mullis于1993年获得诺贝尔化学奖，PCR和DNA 重组技术一样意义深远
PCR不只是一个方法改进 ▪ Mullis的上司有句“名言” ， “我们要扩增这么 多DNA样品有什么用” ； ▪ 到了1991，Cetus公司以3亿美元的转让费将PCR 相关专利转让给瑞士Hoffman LaRoche 公司，并 在此后的经营中又获得了数亿美元的分红； ▪ Mullis于1993年获得诺贝尔化学奖，PCR和DNA 重组技术一样意义深远