（二）、细胞凋亡的检测1.形态学观测：（1）染色法：（staining）台盼蓝（trypanblue）：活细胞排斥，但可使死细胞着色；DAP1：是常用的一种与DNA结合的荧光染料，用DAP1染色借助荧光显微镜，可以观察到细胞核的形态变化：姬姆萨（Giemsa）：可以使染色质着色，便于在普通光学显微镜下观察到染色质固缩、调亡小体的形成等调亡过程。（2）透射和扫描电镜观察：可观察调亡细胞的形态、结构变化，如染色质固缩、凋亡小体的形成、细胞发泡等现象
（二）、细胞凋亡的检测 1.形态学观测： ⑴染色法:（staining） 台盼蓝（trypan blue）:活细胞排斥，但可使死细胞着色； DAP1：是常用的一种与DNA结合的荧光染料，用DAP1染色 借助荧光显微镜，可以观察到细胞核的形态变化； 姬姆萨（Giemsa）：可以使染色质着色，便于在普通光学显微 镜下观察到染色质固缩、凋亡小体的形成等凋亡过程。 （2）透射和扫描电镜观察： 可观察凋亡细胞的形态、结构变化，如染色质固缩、凋亡小 体的形成、细胞发泡等现象
DAP1染色显示调亡细胞的染色质凝集BVA：正常细胞核B：凋亡细胞核
DAP1染色显示凋亡细胞的染色质凝集 A：正常细胞核 B：凋亡细胞核
2.DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带即凋亡细胞的DNA由于在核小体间发生断裂，产生200bp及其整倍数的片段，经琼脂糖凝胶电泳呈现出的梯状条带1234567细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图1.细胞色素c诱导0调亡特异h核酸酶在-2kb核小体随2.细胞色素c诱导1机切割h-1kb3.细胞色素c诱导2h-500bp细胞色素c诱导3h-200bp5.细胞色素c诱导4h阴性对照6.7.MarkerB
细胞色素c诱导的凋 亡细胞DNA电泳图 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker 2. DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 即凋亡细胞的DNA由于在核小体间发生断裂，产生200bp及其整倍数的片段， 经琼脂糖凝胶电泳呈现出的梯状条带
3.TUNEL测定法：即DNA断裂的原位末端标记法针对DNA分子中断裂缺口中的3'OH进行原位标记，凋亡细胞的核DNA中产生的3'OH末端，可帮助荧光素进行原位标记，并用荧光显微镜进行观察。248a--16sCon16s左：正常16体节期的斑马鱼胚胎在发育过程中有少量细胞发生调亡：右：突变体的中板神经细胞发生大量调广
3.TUNEL测定法：即DNA断裂的原位末端标记法 针对DNA分子中断裂缺口中的3’OH进行原位标记，凋亡细胞的核DNA中产生 的3’OH末端，可帮助荧光素进行原位标记，并用荧光显微镜进行观察。 左：正常16体节期的斑马鱼胚胎在发育过程中有少量细胞发生凋亡； 右：突变体的中枢神经细胞发生大量凋亡
4.彗星电泳法（cometassay）彗星电泳法的原理是将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中，经裂解处理后，再进行短时间的电泳，并用荧光染料染色。凋亡细胞中的DNA降解片段在电泳时迁移较快，使细胞核呈现出一种星式图案，而正常细胞核则保持圆球形。5.流式细胞分析：根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细胞，同时又能观察细胞的周期状态
4. 彗星电泳法（comet assay）彗星电泳法的原理是将单个细胞悬 浮于琼脂糖凝胶中，经裂解处理后，再进行短时间的电泳，并 用荧光染料染色。凋亡细胞中的DNA降解片段在电泳时迁移较 快，使细胞核呈现出一种彗星式图案，而正常细胞核则保持圆 球形。 5. 流式细胞分析：根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶 使DNA 产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细 胞，同时又能观察细胞的周期状态