他们的方法是 (1)去模板:用 DNAase处理Ecoi抽提 物,使DNA降解,除去原有的细菌模板。 (2)加入polU:合成了多聚苯丙氨酸 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功 同时还表明UU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入 polyA,poy和poyG结果相 应地获得了多聚赖氨酸,多聚脯氨酸和 多聚甘氨酸
他们的方法是: (1) 去模板：用DNAase处理E.coli抽提 物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 (2) 加入pol U：合成了多聚苯丙氨酸， 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功， 同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC 和polyG 结果相 应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和 多聚甘氨酸
(3)按比例加入2种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离 RNA PO酶,无法按设计的模板 来合成RNA, Nirenberg又想出了一种新的方法,就 是按一定的碱基比例来合成RNA 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP, 碱基比为U:G=5:1, 它们能组成8种三联体: UUU UUG UGU GUU GGG GGU GUG UGG U和G将随机地加入到三联体中,这样按比例各个 位于上进入U和G的概率不同,。如氦基酸测定结 果
(3) 按比例加入２种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离RNA pol酶，无法按设计的模板 来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就 是按一定的碱基比例来合成RNA。 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP， 碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G将随机地加入到三联体中，这样按比例各个 位于上进入U和G 的概率不同，。如氨基酸测定结 果：
如UU:UGG=(5×5×5):(5×1×1) 龙,=25 同理UUU:UUG=5:1 根据检测结果推测: 苯丙氨酸(UUU):半胱氨酸(UGU) 5 苯丙氨酸(UU):缬氨酸(GUU) 苯丙氦酸(UU):甘氨酸(GU) 24
如UUU：UGG＝（555）:（511） ＝ 25 ： 1 同理UUU：UUG ＝5 ：1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU） ＝ 5 ： 5 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GUU） ＝ 24 ： 1
五,三联体结合实验 1964年 Nirenberg 又采用 三联体结合实验 (1)tRNA和氨基酸及三 联体的结合是特异的 2)上述结合的复合体大 分子是不能通过硝酸纤 维滤膜的微孔,而 tRNA-氨基酸的复合体 Figure 1. 13 Har Gobind Khorana(left) and Marshall Nirenberg 是可以通过的
五.三联体结合实验 1964年Nirenberg又采用 三联体结合实验 (1) tRNA和氨基酸及三 联体的结合是特异的； (2) 上述结合的复合体大 分子是不能通过硝酸纤 维 滤 膜 的 微 孔 ， 而 tRNA- 氨基酸的复合体 是可以通过的
ACA ACA agA 二一 UCU UCU UCU AGA UGU AGA 图14-3三联体结合实验。(上)输入翻译系统的RNA和标记的氨基酸(以灰色表示) 不符。(下)输入翻译系统的RNA和标记的氨基酸(以灰色表示)相符
A C A U G U A G A Ser A C A Thr A G A A C A A C A U G U Ser Thr NC Ser U C U U C U U G U U C U A G A Thr U C U U G U A G A Thr Ser NC Thr 图 14-3 三联体结合实验。(上)输入翻译系统的 RNA 和标记的氨基酸(以灰色表示) 不符。(下) 输入翻译系统的 RNA 和标记的氨基酸(以灰色表示)相符