⑧SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE 蛋白质SDS复合物(1 g:1.4g),长椭圆棒 形掩盖了蛋白质原有电 未知蛋白 荷差别和形状的差异, 分宁量减少 迁移率是分子量的函 相对迁移率 数—分子筛效应 SDS-PAGE电泳分离蛋白 相对迁移率=条带迁移距离/染料迁移距离
11 ☺ SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 蛋白质-SDS复合物（1 g : 1.4 g），长椭圆棒 形掩盖了蛋白质原有电 荷差别和形状的差异， 迁移率是分子量的函 数——分子筛效应 lgM 相对迁移率=条带迁移距离/染料迁移距离
◆使用巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT还原二硫键 ◆所测的分子量为亚基或单条肽链的分子量 ◆不适用此方法的蛋白质 电荷异常或构想异常、较大辅基、某些结构蛋白 分离的分子量范围
12 分离的分子量范围 使用巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT)还原二硫键 所测的分子量为亚基或单条肽链的分子量 不适用此方法的蛋白质 电荷异常或构想异常、较大辅基、某些结构蛋白
SDS-PAGE分离的分子量范围 丙烯酰胺浓度(5%)线性分离范围(KD) 15 12-43 10 16-68 7.5 36-94 57—212 双丙烯酰胺:丙烯酰胺摩尔比为1:29
13 SDS-PAGE分离的分子量范围 丙烯酰胺浓度（5%） 线性分离范围（KD） 15 12—43 10 16—68 7.5 36—94 5.0 57—212 双丙烯酰胺：丙烯酰胺摩尔比为1:29
等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF-PAGE) 蛋白质的等电点p|3-11 ●原理等电聚焦pH梯度介质中,蛋 白质按pl大小聚焦在相应的pH处 连续的pH梯度 安福林( Amphol ine);IEF固相系统 ●聚丙烯酰胺凝胶的作用 防扩散、抗对流的支持介质
14 ☺等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳（IEF-PAGE） 蛋白质的等电点 pI 3-11 原理 等电聚焦——pH梯度介质中，蛋 白质按pI大小聚焦在相应的pH处 连续的 pH 梯度 安福林（Ampholine)；IEF固相系统 聚丙烯酰胺凝胶的作用 防扩散、抗对流的支持介质
e 6 图8-23加样方式 1.样品加在任何一个位置2.聚焦后结果相同 3.样品加在整个胶中
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