第一节目的基因的获得 、化学法直接合成基因 2、从基因组文库中钓取目的基因 3、从cDNA文库中钓取目的基因 4、通过PCR直接扩增出目的基因
第一节 目的基因的获得 1、化学法直接合成基因 2、从基因组文库中钓取目的基因 3、从cDNA文库中钓取目的基因 4、通过PCR直接扩增出目的基因
3、从cDNA文库中钓取目的基因 A.文库的构建 从真核生物基因组文库中直接分离到目的基因十分困难, 这主要是因为:真核生物的基因组太大,而其中非编码区占的 比例很大;另外,真核基因大都有很大的内含子,很难从基因 组文库中直接分离 到目的基因。 克隆真核生物的 基因往往是从cDNA 文库的建立开始的。 主要步骤包括:总 RNA的提取和纯化; CDNA的合成 CDNA文库的构建
3、从cDNA文库中钓取目的基因 从真核生物基因组文库中直接分离到目的基因十分困难， 这主要是因为：真核生物的基因组太大，而其中非编码区占的 比例很大；另外，真核基因大都有很大的内含子，很难从基因 组文库中直接分离 到目的基因。 克隆真核生物的 基因往往是从cDNA 文库的建立开始的。 主要步骤包括：总 RNA的提取和纯化； cDNA的合成； cDNA文库的构建。 A. 文库的构建
3、从cDNA文库中钓取目的基因 A.文库的构建 多聚T引物 反转录酶 5 TTTTTTTTT 3'AAAAAAAA AAAAAA 碱降解RNA DNA聚合酶 TTTTTTTT 3'AAAAAAAZ 5’ TTTTTTTTT S1核酸酶 AAAAAAAA 加接头 插入载体并 导入寄主细胞 重组 克隆 CDNA文库的构建过程
5’ TTTTTTTTT DNA聚合酶 I 3、从cDNA文库中钓取目的基因 3’ AAAAAAAA AAAAAAAA 5’ TTTTTTTTT 3’ AAAAAAAA 多聚T引物 反转录酶 AAAAAAAA TTTTTTTTT 碱降解RNA S1核酸酶 加接头 插入载体并 导入寄主细胞 重组 克隆 cDNA文库的构建过程 A. 文库的构建