核酸分子条交的基本原理 DNA变性 方法 *热变性:90~100%C *酸碱变性:常采用碱变性 *化学试剂变性:尿素、甲酰胺、甲醛等 特点:粘度增加、密度增加、增色效应、溶 解温度( melting temperature,Tm) DNA复性或杂交( hybridization) DNA/DNA, DNA/RNA, RNA/RNATF
核酸分子杂交的基本原理 • DNA变性 – 方法 * 热变性：90~100℃ * 酸碱变性：常采用碱变性 * 化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等 – 特点：粘度增加、密度增加、增色效应、溶 解温度(melting temperature,Tm) • DNA复性或杂交(hybridization) – DNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNA等
退火 退火 入处a 双螺旋DNA 加热 部分解链加热 8 单股随机卷出 图7-1DNA变性和复性
Optical density 14 13 两条链分开 12 1} 3050 T 95100110[c] 图101DNA热变性曲线结构和温度的关系
影响条交的因素 核酸分子的浓度和长度 浓度大,复性快;分子量大,复性慢 温度 ·离子强度 杂交液中的甲酰胺 ·核酸分子的复杂性 非特异性杂交反应 预杂交:封闭非特异性杂交位点,用鲑鱼精子DNA
影响杂交的因素 • 核酸分子的浓度和长度 – 浓度大，复性快；分子量大，复性慢 • 温度 • 离子强度 • 杂交液中的甲酰胺 • 核酸分子的复杂性 • 非特异性杂交反应 – 预杂交：封闭非特异性杂交位点，用鲑鱼精子DNA
分子条交的基本方法 Southern印迹法 Northern印迹法 斑点印迹杂交 原位杂交 Western印迹法 液相杂交
分子杂交的基本方法 • Southern 印迹法 • Northern 印迹法 • 斑点印迹杂交 • 原位杂交 • Western 印迹法 • 液相杂交