A TTCT GGATACCCA-5′ 诱变引物 AAGAG CCTATGGGT M13 (Wild Type) TAG ATC am dNTP DN Apol 传代 杂交 复制 TCG AGC W. T 图5-4定点窦变技术建立琥珀型突变体
n M13 M13 M13 甲 丙 图5-5引物设计原则 甲:多点寞变;乙:缺失突变;丙:插入突变
容许宿主 模板 U>T (dut ung 含U模板 RZ1032 甲 乙 A 模板-引物杂交 dNTP 延长 U DNApol 丙 非容许宿主 JM103 容许宿主 RZ1032 1/2 A A 存 死 活 戊 图5-8定点突变的 Kunkel法
原有序列 改建成 TTTGAA~定点突变 TTCGAA一 (不是限制性内切酶切点) ( Hind il切点)
第九章DNA序列测定 末端终止法-待测单链DNA模板引物 四种dNTP(其中一种用2P/5标记)终止剂 ( ddNtP)DNA聚合酶 Sanger发明:两次获得诺贝尔奖 分别得到 dda ddt ddg ddo结尾的片段
第九章 DNA序列测定 • 末端终止法--待测单链DNA 模板 引物 四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂 (ddNTP) DNA聚合酶 • Sanger发明：两次获得诺贝尔奖 • 分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段