《临床免疫学检验技术》理论教学大纲 2016-10-2112:14 (供四年制本科医学检验技术专业使用) I前言 临床免疫学检验技术是医学检验技术专业的一门主干专业课程。是研究免疫学基础理论与技术在临床疾病的病 发生机制、诊断与鉴别诊断、治疗效果评价和预后判断等方面应用的一门学科。主要通过利用多种免疫学技术 对与免疫反应有关的各种免疫物质（如蛋白质抗原、激素、药物、自身抗体、病原体特异抗体、细胞亚群等）进行 检测并应用于临床，以便快速和准确地诊新疾病、治疗监测及预后等。掌握临床免疫学检验的基本理论、基本知识 和基本技能，以临床免疫学检验技术的方法建立、应用及影响因素为核心内容，并注重本学科领域的发展和前沿知 识的应用，使学生通过系统的学习，能充分理解兔疫学检验技术的关键点，并具备基本的方法建立能力和分析解决 问题的能力 本大纲适用于医学检验技术专业本科学生使用。现将大纲使用中有关问题说明如下： 一为了使教师和学生更好地学提教材，大纲每一章节均由教学目的、教学要求和教学内容三部分。教学目的 注明教学目标，教学要求分掌握、熟悉和了解三个级别，教学内容与教学要求级别对应，并统一标示（核心内容即 知识点以下划实线，重点内容以下划虚线，一般内容不标示)便于学生重点学习。 :教师在保证大纲核心内容的前提下，可根据不同教学手段，讲授重点内容和介绍一般内容，有些内容留给 学生自学。 三总教学参考学时为90学时，其中理论46学时，实验44学时。理论与实验学时之比1.05：1。课程代码 0903002. 四教材：《临床免疫学检验技术》，人民卫生出版社，李金明、刘辉主编，第1版，2015。 Ⅱ正文 第一章概论 一教学目的 介绍免疫学发展简史。了解临床免疫学简介。熟悉免疫学技术的发展历程和临床免疫学检验技术的应用 二教学要求 1.掌握基本概念：免疫学、免疫器官、免疫细胞、免疫分子、免疫应答、免疫球蛋白、簇分化抗原、免疫学 检验、临床免疫学。各种免疫学检验技术临床应用特点。 2.熟悉临床免疫学的重要任务及内容、发展新动态。 3.了解免疫学检验技术的发展及在免疫性疾病的发病机制研究和临床诊断中的地位 三教学内容 (一)免疫学基础简介：免疫学概念，免疫器官（中杯、外周免疫器官），免疹细胞（淋巴细胞、免疫辅助细 胞)，免疫分子（免疫球蛋白、补体系统、细胞因子、黏附因子、人类自细胞分化抗原），免披与免疫应签。 (二)临床免疫学简介：临床免疫学感念，免疫病理与免疹性疾病，感染免疫，移植免疫，肿免疫 (三)免疫学技术发展与临床免疫检验：免疫学技术发展历程，临床免疫学检验技术与临床免疫检验 第二竞抗原和抗体及其结合反应
一教学目的 通过本章学习，使学生认识和掌握抗原抗体反应的基础是抗原决定族与相应抗体高变区分子结构的互补性和亲 和性。学习免疫反应的相关基本概念和特点，是进一步学习临床免疫学的基础。 二教学要求 1。堂据抗原抗体结合反应的原理、特占及影响因孝，抗原、负疫原性、免疫反应性、完全抗原、半抗原、表 位、天然抗原、 合成多肽抗原、基因重组抗原、抗体、多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体、初次应答、再次 应答、亲和力、亲合力、交叉反应、等价带、前带和后带现象的概念。 2.熟悉抗原和抗体的特性：免疫测定中抗原和抗体的分类：抗体产生的规律 3。了解固相表面抗原抗体结合反应的特点。 三教学内容 (一)抗体，各的抗体的根令，抗休的特性（持异性、多样性。免恋原性），用干鱼恋定的抗体公类（名克 隆抗体、单克隆抗体、基因T程抗体的念，抗体产生的律（初次应答、面次应签、城原、TI抗原），。 (三)抗原抗体结合反应的原理：抗原抗体结合力（静电引力、范德华引力、氢键、疏水作用力），抗原抗体 周相化抗原或拉体的构象)· (四)抗原抗体结合反应的特点：特异性、可逆性、比例性（签价带、前带、后带）、阶段性 (五)影响抗原抗体结合反应的因素：抗原抗体本身因素（抗原因素、抗体因素、抗原扩体的比例），反应基 质因素，实验环境因素（虫解质、酸破度、温度） 第三章抗体制备 一教学目的 通过学习本章抗体制备及相关概念，了解抗体的特异性是免疫反应的基础，抗原的纯化则是制各高效价特异性 抗体的前提。 二教学要求 1.学握免疫原、多克隆抗体、单克隆抗体、免疫佐剂、基因工程抗体、人源化抗体、双特异性抗体、噬菌体 抗体库技术的概念：免疫佐剂的作用机制：多克隆抗体制备时影响选择动物的因索：杂交瘤技术的基本原理：噬菌 体抗体库枝术的主要特点。 2.熟悉可溶性抗原的纯化：常用载体的类型、半抗原与载体的连接方法：抗血清鉴定及保存：单克隆抗体制 备技术：基因工程抗体库技术。 3.了解免疫球蛋白片段的制备：多克隆抗体制备过程中动物免疫程序：单克隆抗体的应用。 三教学内容 (一)免疫原的制备：颗粒性抗原，可溶性拉原（组织和细胞可溶性抗原的粗提、可溶性抗原的纯化、免疫球 蛋白片段的制备)和半抗原（载体选择、半抗原-载体连接方法）
(二)免疫佐剂：免疫佐剂的枢念。佐剂的种类（如细胞因子、卡介苗、氢氧化铝、胞苷酸、液体石蜡和羊毛 脂等)，佐剂的生物学作用：佐剂的作用机制。 (三)多克隆抗体的制备及应用：动物的选择（抗原与动物种屈间的关系、动物的个生因素、抗原性质与动物 种类、抗体用量和要求)，抗原剂量的选择，免疫程序，采血方法，抗血清的鉴定及保存（效价与纯度、特异性、 亲和力、保存)，抗体的纯化（盐析法、离子交换层析法、亲和层析法和吸附法等），多克隆抗体的特性和应用。 (四)单克隆抗体的制各及应用：杂交瘤技术的基本原理，杂交瘤细胞的制名过程，单克隆抗体的生产，单克 隆抗体纯化，单克隆抗体鉴定，单克降抗体的特性，单克隆抗体的应用。 (五)基因工程抗体及应用：基因工程抗体橱念，人源化抗体（人-服嵌合抗体、CR植入抗体），小分子抗体 (抗原结合片段Fab、可变区片段Fv、重链抗体b)，双特异抗体（双特异抗体分子的构建和应用），抗体融合 蛋白（含Fab段或Fv段的、含F©的抗体融合蛋白），噬菌体抗体库技术（概念、噬菌体抗体库、天然抗体库、免疫 拉体库、合成拉体，重组多克摩抗体， 基因工程抗体的应用（肿瘤治疗、肿瘤影像分析、抗感染、细胞内抗 体、临床诊断)。 第四章标记物及其与抗原抗体的结合物制备 一教学目的 通过本章理论学习，了解各种标记物的特性和标记物与特异抗原或抗体交联成结合物的制备技术。标记物是高 灵敏免疫测定的物质基础，而结合物则是标记免疫测定试剂的核心组分。 二教学要求 1.学握常见的标记物及其特性：常见标记物与抗原抗体结合物制备基本方法：常见的双功能交联试剂及其特 性。标记物、荧光底物、酶活性单位 三价稀土离子、酶促化学发光剂、电化学发光剂、量子点、间接偶联、胶体 金、双功能交联试剂法的概念。 2.熟悉标记物与抗体原抗体结合物的鉴定、纯化与保存：常见标记方法的原理 3.了解量子点的制备方法与表面修饰：胶体金的制备。 三教学内容 (一)标记物的种类及特性：放射性核素：荧光物质（荧光者如EITC200、PE、TRITC,稀士离子，其他如 4-甲基伞酮-B-D-半乳糖苷等)；酶和酶作用底物（常用酶如R即、ALP、B-半乳糖苷酶，常用酸作用底物如RP的 底物OPD、TB、AEC、HPA,ALP的底物PP、BCIP/NBT、4-P,B-Gal的底物4-UG):化学发光剂（直接的有吖啶 酯和三联此啶钉，睡保反应的有鲁米诺及衍生物和APP):量子点（制备及表面修饰）：胶体金（制备原理及方 法)。 (二)常用的交联剂及特性：均一的双功能交联剂（磁二亚胺缩合法戊二醛法过碘酸盐氢化法、-羟琥珀 亚酰胺活化法)，非均一的双功能交联剂。 (三)放射性核素与抗原抗体的结合物制备：基本方法，放射性核素标记结合物的纯化、鉴定及保存。 (四)荧光素与抗原抗体的结合物制备：基本方法（搅拌法、透析法），荧光素标记结合物的纯化（透析法、 凝胶过滤法)，鉴定（荧光素与蛋白质的结合率、抗体效价和特异性）及保在。 (五)酶与抗原抗体的结合物制备：基本方法（戊二醛交联法改良过碘酸钠法），标记结合物的纯化、鉴 定及保在 (六)化学发光剂与抗原抗体的结合物制备：基本方法，化学发光剂标记结合物的纯化。鉴定及保在 (七)稀土离子与抗原抗体的结合物制备：基本方法，稀土离子标记结合物的纯化、鉴定及保在
(八)量子点与抗原抗休的结合物制备：基本方法，量子点标记结合物的纯化鉴定及保在。 (九)胶体金与抗原抗体的结合物制备：基本方法，胶体金标记结合物的纯化、鉴定及保存。 第五章免疫凝集试验 (此章为自学章节) 第六章免疫沉淀试验 (此章为自学章节) 第七章放射免疫试验 (此章为自学章节) 第八章荧光免疫试验 一教学目的 通过本章学习，了解荧光免疫试验是将抗原抗体反应的特异性与荧光技术的敏感性相结合的一种检测系统，包 括间接荧光免疫技术、流式荧光免疫试验、时间分辨荧光免疫试验、荧光偏振免疫试验，其中间接荧光免疫技术和 时间分辨荧光免疫试验在临床免疫检验中应用较为重要。 二教学要求 1,掌握间接免疫荧光试验的原理及注意事项：时间分辨荧光免疫试验的原理及方法类型：荧光免疫试验的主 要影响因素和临床应用。 2.熟悉荧光、荧光效率、荧光淬灭、Stokes位移、荧光偏振免疫试验、时间分裤荧光免疫试验、荧光免疫试 验、荧光寿命、微发光谱的概念。流式荧光免疫试验的原理：荧光偏振免疫试验的原理及方法学评价。 .了解荧光显微镜的结构：荧光素-抗体结合物的要求：流式荧光免疫试验的方法及方法学评价间接免疫荧 光试验的实验方法。 三教学内容 (一)荧光免疫试验的组成要素：荧光及荧光物质基础知识（发射光善、激发光潜、荧光激率、荧光寿命、荧 光蓬灭、荧光伯振，荧光物质)，荧光显微镜的构造，荧光素抗体结合物。 (二)间接免疫荧光试验：基本原理，实验方法、注意事项。 (三)流式荧光免疫试验：基本原理，实验方法，方法评价 (四)其他与荧光检测相关的免疫试验：时间分辨荧光免疫试验（基本原理、标记物及标记方法、方法类 型)荧光偏振免疫试验（基本原理、方法评价） (五)荧光免疫试验的临床应用：间接免疫荧光试验（自身抗体测定、微生物快速检查及鉴定、寄生虫诊断、 白细跑分化抗原检测、用A检测、肿瘤组织中肿标检测、激素及酯的组织定位)，其他荧光免疫试验（时间分排菱 光免疫试验可用于内分泌、肚擅、免疫、分子微生物的应里，荧光偏振免疫试验的应用)。 (六)影响荧光免疫试验的主要因素：荧光素-抗体结合物（抗的纯度、特异性、效价、荧光素-抗体结合物 的结合比率)，待检标本（组织、细胞及细茵的制各），其他（反应时间及温度、荧光抗体保存）。 第九章酶免疫试验 一教学目的
学习本章，主要了解酶免疫试验是以酶标记抗原或抗体作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原-抗 体反应的特异性相结合的免疫检测技术，广泛用于抗原抗体的检测及免疫组化实验，对其分类及技术要点和实验原 理的掌握是实验室工作者必各的基础知识。 二教学要求 L,掌握固相载体的种类、包被抗原或抗体的方法、酶结合物及作用底物：酵联免疫吸附试验(ELIS)的基本原 理、方法类型及反应原理。酶联免疫斑点试验(ELISPOT)基本原理和结果报告。发光酶免疫试验的基本原理及反 应类型。种免疫试验、包被、封闭、均相陆免疫试验、联免疫真点试验(LISPOT)、ELISA、IT、CEDIA和种 结合物的念。 2.熟悉酶免疫试验的分类：ELIS方法建立的基本步骤：常用商品醇免疫试验试剂的方法特点：酶免疫试验的 主要影响因素。 3.了解均相薛免疫试验及反应原理：酶免疫试验的临床应用。 三教学内容 (一)酶免疫试验的组成要素：固相搅体（要求、种类和选超），包被抗原或抗体（直接和间接包被），结 合物整的显色底物与酶促发光底物 (二)堕免疫试验的分类：均相酶免疫试验（酶放大免疫试验技术EMIT、克隆酶供体免疫试验CEDIA)，异相 酶免疫试验（液相酶免疫试验、固相南免疫试验） (三)联免疼吸附试验，TS基本原理，LA方法建立的基本步漫（方法举型建立和对建立的方法评 价)，LISA方法类型及反应原理（夹心法、间接法、竞争法、捕获法） (四)酶联免疫斑点试验：基本原理，数据处理及结果报告 (五)发光酶免疫试验：基本原理，化学发光豳免疫试验(RP和ALP标记的酶发光反应)，荧光酶免疫试验 (六)酶免疫试验的临床应用及常用商品试剂的方法特点：均相酶免疫试验（临床应用、常用商品试剂的方法 盎点)，异相酶免疫试验(LSA、ELISPOT、.EA的临床应用和密用商品试剂的方法特点)。 (七)影响酶免疫试验的主要因素：试剂盒原材料因素（抗原或抗体的选择、固相载休及豳结合物），标本因 素、实验室环境因者，换作因素（试剂准备、标本及试剂加入、温度、洗涤显色比显结果到断） 第十章化学发光免疫试验 一教学目的 通过本章学习，了解发光免疫分析是将发光分析与免疫反应相结合的一种新型标记技术，主要用于微量抗原或 抗体的检测，对其分类和技术要点及其原理的掌握较为重要。 二教学要求 1.掌握化学发光产生的条件：常用的化学发光剂种类：化学发光免疫试验的类型及原理和临床应用。化学发 光、化学发光免疫分析、直接化学发光免疫试验、感光微粒的概念。 2.熟悉发光的分类；化学发光免疫试验的非均相分离方式；临床常用化学发光免疫试验试剂方法特点。 3.了解直接化学发光剂及电化学发光剂的特征：影响化学发光免疫试验的主要因素。 三教学内容