(三)DNA复制中所需的酶和辅因子 1、引物酶(Primase) 功能:以DNA为模板,以NTP为原料, 合成一小段RNA,作为合成DNA的引物 (Primer) 所有的DNA聚合酶都只有按模板链的指 令,在引物3’一O端延伸新链的功能,没有 从头合成的活性。 引物E与有关蛋白质结合成引发体 (pr imosome)
(三)DNA复制中所需的酶和辅因子 1、引物酶(Primase) 功能:以DNA为模板,以NTP为原料, 合 成 一 小 段 RNA, 作 为 合 成 DNA 的 引 物 (Primer) 。 所有的DNA聚合酶都只有按模板链的指 令,在引物3 ’-OH端延伸新链的功能,没有 从头合成的活性。 引物E与有关蛋白质结合成引发体 (primosome)
2、DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶有三种: (1)DNA聚合酶I 主要功能:是负责DNA的损伤修复及 在DNA复制中,切除引物,填补空隙的作 用。 若用枯草菌蛋白酶处理此酶,可得两 个片段:
2、DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶有三种: (1)DNA聚合酶Ⅰ 主要功能:是负责DNA的损伤修复及 在DNA复制中,切除引物,填补空隙的作 用。 若用枯草菌蛋白酶处理此酶,可得两 个片段:
A、分子量为76kD,有5?一3聚合酶 和3’-5外切酶活性,称Klenow片段。 5’一3聚合酶活性催化DNA链沿5'-3?方 向延长,单个核苷酸加到3?-未端上形成 3,5磷酸二酯键。 3’一5’外切E活性能及时切除错配核 苷酸(发生错配时,此酶活性提高),与 5’一3'聚合酶活性共同保证DNA复制过程 中的高保真度
5’—3’聚合酶活性催化DNA链沿5’-3’方 向延长,单个核苷酸加到3’-未端上形成 3’,5’磷酸二酯键。 3’—5’外切E活性能及时切除错配核 苷酸(发生错配时,此酶活性提高),与 5’—3’聚合酶活性共同保证DNA复制过程 中的高保真度。 A、分子量为76kD,有5’—3’聚合酶 和3’—5’外切酶活性,称Klenow片段
B、分子量34KD,5’一3外切酶活性 作用于双链DNA的碱基配对部分,从5 端切下单核苷酸或寡聚核苷酸。在DNA损 伤修复和切除RNA引物中发挥作用
B、分子量34KD,5’— 3 ’外切酶活性 作用于双链DNA的碱基配对部分,从5 ’ 端切下单核苷酸或寡聚核苷酸。在DNA损 伤修复和切除RNA引物中发挥作用
(2)DNA聚合酶IⅡ和III DNA聚合酶II:主要负责DNA的损伤修复 具有 5’-3聚合活力 3’—5外切活力 DNA聚合酶I:是催化大肠杆菌DNA复制 的主要酶。具有 5’—3聚合活力 3’—5外切活力 5’一3外切活力
(2)DNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ DNA聚合酶Ⅱ:主要负责DNA的损伤修复 具有 5’—3’聚合活力 3’—5’外切活力 DNA聚合酶Ⅲ:是催化大肠杆菌DNA复制 的主要酶。具有 5’—3’聚合活力 3’—5’外切活力 5’—3’外切活力