RESEARCH ARTICLE Enzymatic Amplification ofβ- Globin1985年12月20日,Mui的同 Genomic Sequences and Restriction Site事 Saiki在 Science上发了一篇 △ nalysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia论文,方法中用了PCR技术。」 Randall K. Saiki, Stephen Scharf, Fred Faloona, Kary B. Mullis Glenn T Horn, Henry A. Erlich, Norman Arnheim States Patent 46B52 幸July28,1987 for amplifying nucleic acid sequences Inventors (Kensington, CA) Assignee: Cetus Corporation (Emeryville, CA) [*] Notice: The portion of the term of this patent subsequent to July 28, 2004 has been disclaime 791308 filed: October 25, 1985 Specific Synthesis of DNA In Vitro via a Polymerase Catalyzed Chain reaction(Methods in Enzymology,1987,155:33550) Primer-directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNa Polymerase Science,1988,239(4839):487-91
1985年12月20日，Mullis的同 事Saiki在Science上发了一篇 论文，方法中用了PCR技术。 Primer-directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase Science,1988,239(4839):487-91 Specific Synthesis of DNA In Vitro via a Polymerase Catalyzed Chain Reaction (Methods in Enzymology, 1987,155:335-50 )
PCR革命性的技术创新 (1989年十大科技发明之首) 1.敏感 2.特异 3.高效 快速 5.简便 6.重复性好 7.易自动化 1988年Saik许等将耐热DNA聚合酶(Iaq) 8.用途广泛 引入了PCR技术
PCR—— 革命性的技术创新 （1989年十大科技发明之首） 1. 敏感 2. 特异 3. 高效 4. 快速 5. 简便 6. 重复性好 7. 易自动化 8. 用途广泛 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq） 引入了PCR技术
PCR革命性的技术创新 PCR只是一个简单的不起眼玩艺, 如果你的研究能力一般,那么,改革本研究领域中大家习 以为常的最基本的技术,你就有可能获诺贝尔奖。 Mullis PCR只是一个概念,所发生的奇迹是:PCR概念变成了可 操作的实验系统,变成了一项成熟的技术,后者又上升成 为新的概念, -Paul rabinow
PCR只是一个简单的不起眼玩艺， 如果你的研究能力一般，那么，改革本研究领域中大家习 以为常的最基本的技术，你就有可能获诺贝尔奖。 —— Mullis PCR只是一个概念，所发生的奇迹是：PCR概念变成了可 操作的实验系统，变成了一项成熟的技术，后者又上升成 为新的概念。 … ——Paul Rabinow PCR—— 革命性的技术创新
二.PCR技术的原理 生物体内DNA复制 PCR扩增DNA 相同处 模拟DNA的体内复制, 模板DNA 模板DNA 适宜的反应环境 Reaction Buffer 在合适的体外条件下 4种脱氧核苷酸 4种脱氧核苷酸 实现DNA的体外复制。不同处 非特异引物 特异引物 DNA聚合酶 耐热的Iaq酶等 同一细胞内DNA复制一次PCR仪中连续复制
二. PCR技术的原理 模拟DNA的体内复制， 在合适的体外条件下 实现DNA的体外复制。 生物体内DNA复制 PCR扩增DNA 相同处 模板DNA 模板DNA 适宜的反应环境 Reaction Buffer 4种脱氧核苷酸 4种脱氧核苷酸 不同处 非特异引物 特异引物 DNA聚合酶 耐热的Taq酶等 同一细胞内DNA复制一次 PCR仪中连续复制
第一步 X XX< e<<< 加热变性、双链打开 PCR循环 第二步 4 cycle= 16 Amplicon 退火、引物与单链结合Dow6wox 5 cycle= 32 Amplicon 6 cycle 64 Amplicor 变为两条双链DNA 风河 7 cycle 128 Ampli 第三步-引物延伸 历经~30循环
第一步 加热变性、双链打开 第二步 退火、引物与单链结合 第三步 - 引物延伸 变为两条双链DNA PCR 循环 历经 ~30 循环