1、DNA 1.1DNA的组成和结构 DNA是一类有四种脱氧核酸按照一定的 顺序聚合而成的大分子。脱氧核酸按由 脱氧核糖、碱基和磷酸组成。碱基由A、 T、G、C四种。 ● 生物体内的DNA分子有的以线性形式存 在，有的以环状存在
1、DNA 1.1 DNA的组成和结构 • DNA是一类有四种脱氧核酸按照一定的 顺序聚合而成的大分子。脱氧核酸按由 脱氧核糖、碱基和磷酸组成。碱基由A、 T、G、C四种。 • 生物体内的DNA分子有的以线性形式存 在，有的以环状存在
1.2DNA功能 DNA分子能在细胞内复制-半 保留半不连续复制 携带遗传信息--DNA到mRNA 到蛋白质
1.2DNA功能 • DNA分子能在细胞内复制----半 保留半不连续复制 • 携带遗传信息----DNA到mRNA 到蛋白质
2、限制性内切酶和DNA片段化 限制性内切酶的定义识别双链DNA中特殊核苷酸序 列，并在合适反应条件下使每条链一定位点上的磷酸 二脂键断开，产生具有3-OH和5？-P基团的DNA片断 的内切脱氧核糖核酸酶 ·内切酶识别序列-~多数识别序到有6个核苷酸组成， 具有旋转对称或者左右互补对称 ·酶切位点-一般是识别序到的内部 内切酶反应系统-同其他酶一样，反应系统除酶本身 以外，还包括反应底物和缓冲液，合适的温度。 酶切DNA的方法-单酶切法、双酶切法、部分酶切法
2、限制性内切酶和DNA片段化 • 限制性内切酶的定义----识别双链DNA中特殊核苷酸序 列，并在合适反应条件下使每条链一定位点上的磷酸 二脂键断开，产生具有3‘-OH和5’-P基团的DNA片断 的内切脱氧核糖核酸酶 • 内切酶识别序列----多数识别序列有6个核苷酸组成， 具有旋转对称或者左右互补对称 • 酶切位点-一般是识别序列的内部 • 内切酶反应系统----同其他酶一样，反应系统除酶本身 以外，还包括反应底物和缓冲液，合适的温度。 • 酶切DNA的方法---单酶切法、双酶切法、部分酶切法
3、特异性DNA片段的PCR扩增 PCR基本原理 DNA变性--模板DNA变性单链DNA 。复性--引物与单链DNA杂交 ·退火--Taq酶催化引物合成模板DNA的 互补链
3、特异性DNA片段的PCR扩增 PCR基本原理 • DNA变性----模板DNA变性单链DNA • 复性----引物与单链DNA杂交 • 退火----Taq酶催化引物合成模板DNA的 互补链
5:G-G 3C-C SG-G-OH S'G-A-OH 9095℃ (引物1)(1物2) 5:G-G- -T-C-3 3-C-C A-G-5 P745"c 循环I,DNA加倍 5￥GG o-8 389-0m A-G.5 70-75C 86 个 SG-G 3C-C A-8 (路)5GG -T-C-3 190-9s 3-C-c A-G-5 H0-83 G-G-OH 循环2，DNA加四倍 SG-G 3c-c A-G.5 70-75'C 6-6 A-G-5 5G-G -T-C31 3-C-C A-G.5 S:G-G 90-9g T-C-3" 3-C-C A-G-5 (略】 37-45C 循环3，DNA加人倍 SG-G HO 8-8-om A-G.5 7075"℃ 88 8-8 天上8 (待扩增的特异性片段) (略) t90-95C 37-45℃ 70-75"c (全部是待扩增的特异性片段) 图27PCR扩增特异性DNA片段过程