现代妇产科进展2016年09月第25卷第9期 Prog Obstet Gynecol, Sep.2016,Vol25,Na.09 论著· TLR3、NF-KB和I-1β在宫颈上皮内瘤变及 宫颈癌中的表达及意义 张倩,张淑兰 (中国医科大学附属盛京医院妇产科,沈阳110004) 【摘要】目的:检测TR3、NF-κB及Ⅱ-1β在宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌中的 表达,探讨3者的相关性及其与临床病理参数的关系。方法:收集中国医科大学附属盛京 医院2014年1月至2014年12月妇科手术标本共120例,其中宫颈鳞癌60例,CIN40 例,正常宫颈20例。采用免疫组化法检测TIR3、NFκB及Ⅱlβ表达。结果:正常宫颈 CIN、宫颈癌中TIR3阳性表达率分别为100%、75%、23.23%,NF-KB阳性表达率为0%、 0%、90%,Ⅱ-1β阳性表达率为0%、70%、90%,各组间差异均有统计学意义(P< 0.005)。TLR3表达与宫颈癌临床分期相关(P<0.05);NF-κB及Ⅱ-β与临床分期、病理 分级及淋巴结转移相关(P<0.05)。TLR3与NFkB、I-1B表达均呈显著负相关(r,= 0.478,P<0.01;r,=-0.45,P<0.01);NFKB与I1B表达呈显著正相关(r=0.589,P< 0.01)。结论:宫颈癌中TLR3呈低表达,NF-KB与Ⅱ1B均呈高表达,可为TLR激动剂治 疗宫颈癌提供一定的理论依据。 【关键词】宫颈癌;宫颈上皮内瘤变;Tl样受体3;核转录因子-κB;臼细胞介素-1β 中图分类号:R711.74文献标志码:A文章编号:1004-7379(2016)09-0646-05 DOI:10.13283/j. cnki. xdfckj z.2016.09.002 Expression and clinical significance of TLR3, NF-KB and IL-1 B in cervical lesions. Zhang Qian, Zhang Shulan. Department of Obstetrics and Gynecology, Shengjing Hospital of China Med- al University, Shenyang 110004 Abstract Objective To detect the expression of TLR3, NF-KB and IL-1B in the cer vical intraepithelial neoplasia( CIN)and cervical squamous cell carcinoma, to investigate the relationship among them and the relationship with clinicopathological parameters. Methods: 120 cases of gynecologic surgery specimen were collected in Shengjing Hospital of China Medical U- niversity between Jan 2014 and Dec. 2014, including 60 cases of cervical squamous cell carci noma,40 cases of CIN and 20 cases of normal cervical tissue. The expression of TLR3, NF-KB and IL-1B was detected using immunohistochemical methods. Results: The positive expression rates of TLR3 were 100%, 75%0, 23. 23% respectively in normal cervix, CIN, and cervical squamous cell carcinoma. The positive expression rates of NF-KB and IL-1B were 0%, 60%0 90% and 0%0, 70%0, 90%. The differences among these groups were statistically significant(P< 0. 005 ). The expression of tlR3 was associated with clinical stage in cervical squamous cell carcinoma(P<0. 05).The expression of NF-KB and IL-1B was associated with clinical stage pathological grading and lymph node metastasis (P<0. 05). There was no significant relationship between the expression and patients'age( P>0. 05). There was significantly negative correlation between the expression of TLR3 and NF-KB, IL-1B(r, =-0 478, P<0. 01; r, =-0 45, P< 盛京自由者(No:201302) *通讯作者Email:zs0909@sina.com 646
·论著· TLR3、NF鄄资B 和 IL鄄1茁 在宫颈上皮内瘤变及 宫颈癌中的表达及意义 * 张 倩,张淑兰** (中国医科大学附属盛京医院妇产科,沈阳 110004) 揖摘要铱 目的:检测 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 在宫颈上皮内瘤变(CIN)与宫颈癌中的 表达,探讨 3 者的相关性及其与临床病理参数的关系。 方法:收集中国医科大学附属盛京 医院 2014 年 1 月至 2014 年 12 月妇科手术标本共 120 例,其中宫颈鳞癌 60 例,CIN 40 例,正常宫颈 20 例。 采用免疫组化法检测 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 表达。 结果:正常宫颈、 CIN、宫颈癌中 TLR3 阳性表达率分别为 100% 、75% 、23. 23% ,NF鄄资B 阳性表达率为 0% 、 60% 、90% , IL鄄1茁 阳性表达率为 0% 、70% 、90% , 各组间差异均有统计学意义 ( P < 0. 005)。 TLR3 表达与宫颈癌临床分期相关(P<0. 05);NF鄄资B 及 IL鄄1茁 与临床分期、病理 分级及淋巴结转移相关(P <0. 05)。 TLR3 与 NF鄄资B、IL鄄1茁 表达均呈显著负相关( rs = -0. 478,P<0. 01;rs = -0. 45,P<0. 01);NF鄄资B 与 IL鄄1茁 表达呈显著正相关( rs = 0. 589,P< 0. 01)。 结论:宫颈癌中 TLR3 呈低表达,NF鄄资B 与 IL鄄1茁 均呈高表达,可为 TLR 激动剂治 疗宫颈癌提供一定的理论依据。 揖关键词铱 宫颈癌;宫颈上皮内瘤变;Toll 样受体 3;核转录因子鄄资B;白细胞介素鄄1茁 中图分类号:R711. 74 文献标志码:A 文章编号:1004-7379(2016)09-0646-05 DOI:10. 13283 / j. cnki. xdfckjz. 2016. 09. 002 Expression and clinical significance of TLR3、NF鄄资B and IL鄄1茁 in cervical lesions. Zhang Qian,Zhang Shulan. Department of Obstetrics and Gynecology,Shengjing Hospital of China Med鄄 ical University,Shenyang 110004 揖Abstract铱 Objective:To detect the expression of TLR3,NF鄄资B and IL鄄1茁 in the cer鄄 vical intraepithelial neoplasia(CIN) and cervical squamous cell carcinoma,to investigate the relationship among them and the relationship with clinicopathological parameters. Methods:120 cases of gynecologic surgery specimen were collected in Shengjing Hospital of China Medical U鄄 niversity between Jan. 2014 and Dec. 2014,including 60 cases of cervical squamous cell carci鄄 noma,40 cases of CIN and 20 cases of normal cervical tissue. The expression of TLR3,NF鄄资B and IL鄄1茁 was detected using immunohistochemical methods. Results:The positive expression rates of TLR3 were 100% ,75% ,23. 23% respectively in normal cervix, CIN, and cervical squamous cell carcinoma. The positive expression rates of NF鄄资B and IL鄄1茁 were 0% ,60% , 90% and 0% ,70% ,90% . The differences among these groups were statistically significant(P< 0. 005). The expression of TLR3 was associated with clinical stage in cervical squamous cell carcinoma(P<0. 05). The expression of NF鄄资B and IL鄄1茁 was associated with clinical stage, pathological grading and lymph node metastasis(P<0. 05). There was no significant relationship between the expression and patients'age (P>0. 05). There was significantly negative correlation between the expression of TLR3 and NF鄄资B,IL鄄1茁( rs = - 0. 478,P < 0. 01;rs = - 0. 45,P < 646 现代妇产科进展 2016 年 09 月第 25 卷第 09 期 Prog Obstet Gynecol,Sep. 2016,Vol郾 25,No郾 09 * ** 盛京自由者(No:201302) 通讯作者 Email:zsl0909@ sina. com
现代妇产科进展2016年09月第25卷第09期 Prog Obstet Gynecol, Sep.2016,Vol25,Na209 0. 01). There was significantly positive correlation between NF-KB and IL-1B(r,=0. 589, P< 0. 01). Conclusion: The expression of TlR3 decreased in cervical cancer, while the expression of NF-KB and IL-1B increased. It could provide certain theory basis for the tlr agonists to treat Key words Cervical cancer; CIN; TLR3; NF-KB; IL-1B 宫颈癌是世界第二常见妇科恶性肿瘤,是发展操作方法按试剂盒说明书。兔抗人TR多克隆抗体购自 中国家女性癌症死亡的首要原因。目前普遍认Abam(1:200稀释);兔抗人NFKB多克隆抗体(1:206 为,持续性人类乳头状瘤病毒( papillomavirus,HPV)释)和兔抗人Ⅱ1B多克隆抗体(1:50稀释)均购自武汉三 感染在宫颈癌及癌前病变发展过程中发挥重要的作鹰;P及DAB试剂盒均购自北京中杉金桥。以PBS缓冲液 用,但并非所有HPV感染都能导致临床意义上的疾代替一抗作为阴性对照,已知阳性的宫颈癌组织作为阳性对 病。Tol样受体( toll-like receptors,mRs)是白细胞照。TLB3、NF…KB及Ⅱ-1B阳性产物主要表达于胞质和 介素1受体家族成员,能识别病原相关分子模式(或)胞核内呈棕黄色颗粒。结果判定标准参照文献。着 ( pathogen associated molecular patterns, PAMPs),通色强度:无着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐 过识别外来病原体的分子结构来调控先天免疫反应色为3分。阳性细胞占计数细胞百分比:阳性细胞≤5%为 和建立具有抗原特异性的获得性免疫6),在维持0分,6%-25%为1分,26%-5%为2分,0%-75%为3 组织稳态中扮演重要角色。TLRs与炎症反应、先天分,>75%为4分。上述两项分值相乘:0分为“-”,1-4分 性免疫以及肿瘤发生发展均有密切的联系。TLR3为“+”,5-8分为“+”,9-12分为“+”将“+”视为 可通过介导各种致病病原体引起宿主免疫防卫反应阴性,“++++”视为阳性。 的同时激活核转录因子KB( nuclear factor-kappa 1.3统计学处理采用SPS19.0软件,计数资料和等级资 NF-KB),在诱导炎性反应和细胞凋亡中发挥作用 料组间表达差异比较采用 Wilcoxon秩和检验,指标间关系采 从而为肿瘤细胞逃避免疫应答创造环境。其在用ymn相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义 乳腺癌、结肠癌及肺癌等多种肿瘤中均存在表达改2结果 变。本研究通过探讨正常宫颈、CN与宫颈鳞癌组21宫颈组织中TR3、NFKB及Ⅱ1B蛋白表达 织中TR3、NFKB及-1B表达及其相关性,旨在正常组织、CIN、宫颈癌组织3组间两两比较, 为研究宫颈癌发生发展的免疫机制及免疫激动剂的T3、NFKB及Ⅱ1B的表达差异均有统计学意义 治疗方向提供实验依据。 (P<0.005),见表1、图1 1材料与方法 22各类型宫颈病变组织中TLR3、NFKB、I-1B 1.1研究对象收集中国医科大学附属盛京医院2014年1表达的相关性TR3与NFKB和B表达均呈 月至2014年12月妇科手术标本120例,其中宫颈鱗癌60显著负相关(r,=-0.478,P<0.01;r,=-0.45,P< 例,CIN40例,正常宫颈20例。按国际妇产科联盟(FICO)0.01);NF-KB与Ⅱ-1B表达呈显著正相关(r,= 200年宫颈癌标准分期。宫颈癌及CIN患者术前均未进行0.589,P<0.01)。 放射、化学或生物治疗。正常宫颈组织均来源于因子宫肌瘤2.3宫颈癌组织中TLR3、NF-KB及Ⅱ-β蛋白表 行全子宫切除术且术后病理证实为慢性宫颈炎的患者 达与临床病理特征的关系TLR3表达与临床分期 有标本具有完整的临床及病理资料,且经两名有经验的病理相关(P<0.05),与病理分级及淋巴转移无关(P> 专业医师镜下观察切片并确诊。组织均经10%甲醛溶液固0.05);NF-KB及I-1β表达与临床分期、病理分级 定、石蜡包埋,4μm厚连续切片。 及淋巴结转移相关(P<0.05),见表2 1.2免疫组化SP法检测TLR3、NF-KB及Ⅱ-B蛋白表达 表1不同宫颈组织中TLR3、NF-kB、I-1B表达 LR3 ++++阳性率(% +++++阳性率(% ++++阳性率(%) 正常宫颈 416000 01021975 01624060 01228070 12223.23 06302490 47
0. 01). There was significantly positive correlation between NF鄄资B and IL鄄1茁( rs = 0. 589,P< 0. 01). Conclusion:The expression of TLR3 decreased in cervical cancer,while the expression of NF鄄资B and IL鄄1茁 increased. It could provide certain theory basis for the TLR agonists to treat cervical cancer. 揖Key words铱 Cervical cancer;CIN;TLR3;NF鄄资B;IL鄄1茁 宫颈癌是世界第二常见妇科恶性肿瘤,是发展 中国家女性癌症死亡的首要原因[1-4] 。 目前普遍认 为,持续性人类乳头状瘤病毒(papillomavirus,HPV) 感染在宫颈癌及癌前病变发展过程中发挥重要的作 用,但并非所有 HPV 感染都能导致临床意义上的疾 病。 Toll 样受体( toll鄄like receptors,TLRs)是白细胞 介素鄄1 受体家族成员[5] ,能识别病原相关分子模式 (pathogen associated molecular patterns,PAMPs),通 过识别外来病原体的分子结构来调控先天免疫反应 和建立具有抗原特异性的获得性免疫[6-7] ,在维持 组织稳态中扮演重要角色。 TLRs 与炎症反应、先天 性免疫以及肿瘤发生发展均有密切的联系。 TLR3 可通过介导各种致病病原体引起宿主免疫防卫反应 的同时激活核转录因子鄄资B( nuclear factor鄄kappa B, NF鄄资B),在诱导炎性反应和细胞凋亡中发挥作用, 从而为肿瘤细胞逃避免疫应答创造环境[8] 。 其在 乳腺癌、结肠癌及肺癌等多种肿瘤中均存在表达改 变。 本研究通过探讨正常宫颈、CIN 与宫颈鳞癌组 织中 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 表达及其相关性,旨在 为研究宫颈癌发生发展的免疫机制及免疫激动剂的 治疗方向提供实验依据。 1 材料与方法 1. 1 研究对象 收集中国医科大学附属盛京医院 2014 年 1 月至 2014 年 12 月妇科手术标本 120 例,其中宫颈鳞癌 60 例,CIN 40 例,正常宫颈 20 例。 按国际妇产科联盟(FIGO) 2009 年宫颈癌标准分期。 宫颈癌及 CIN 患者术前均未进行 放射、化学或生物治疗。 正常宫颈组织均来源于因子宫肌瘤 行全子宫切除术且术后病理证实为慢性宫颈炎的患者。 所 有标本具有完整的临床及病理资料,且经两名有经验的病理 专业医师镜下观察切片并确诊。 组织均经 10% 甲醛溶液固 定、石蜡包埋,4滋m 厚连续切片。 1. 2 免疫组化 SP 法检测 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 蛋白表达 操作方法按试剂盒说明书。 兔抗人 TLR3 多克隆抗体购自 Abcam(1 颐 200 稀释);兔抗人 NF鄄资B 多克隆抗体(1 颐 200 稀 释)和兔抗人 IL鄄1茁 多克隆抗体(1 颐 50 稀释)均购自武汉三 鹰;SP 及 DAB 试剂盒均购自北京中杉金桥。 以 PBS 缓冲液 代替一抗作为阴性对照,已知阳性的宫颈癌组织作为阳性对 照。 TLR3、 NF鄄资B 及 IL鄄1茁 阳性产物主要表达于胞质和 (或)胞核内,呈棕黄色颗粒。 结果判定标准参照文献。 着 色强度:无着色为 0 分,淡黄色为 1 分,棕黄色为 2 分,棕褐 色为 3 分。 阳性细胞占计数细胞百分比:阳性细胞臆5% 为 0 分,6% ~ 25% 为 1 分,26% ~ 50% 为 2 分,50% ~ 75% 为 3 分,>75% 为 4 分。 上述两项分值相乘:0 分为“ -冶,1 ~ 4 分 为“+冶,5 ~ 8 分为“ ++冶,9 ~ 12 分为“ +++冶。 将“ - / +冶视为 阴性,“++ / +++冶视为阳性。 1. 3 统计学处理 采用 SPSS19. 0 软件,计数资料和等级资 料组间表达差异比较采用 Wilcoxon 秩和检验,指标间关系采 用 Spearman 相关性分析。 P<0. 05 为差异有统计学意义。 2 结 果 2. 1 宫颈组织中 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 蛋白表达 正常组织、CIN、宫颈癌组织 3 组间两两比较, TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 的表达差异均有统计学意义 (P<0. 005),见表 1、图 1。 2. 2 各类型宫颈病变组织中 TLR3、NF鄄资B、IL鄄1茁 表达的相关性 TLR3 与 NF鄄资B 和 IL鄄1茁 表达均呈 显著负相关( rs = -0. 478,P <0. 01;rs = - 0. 45,P < 0. 01);NF鄄资B 与 IL鄄1茁 表达呈显著正相关 ( rs = 0. 589,P<0. 01)。 2. 3 宫颈癌组织中 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 蛋白表 达与临床病理特征的关系 TLR3 表达与临床分期 相关(P<0. 05),与病理分级及淋巴转移无关(P> 0. 05);NF鄄资B 及 IL鄄1茁 表达与临床分期、病理分级 及淋巴结转移相关(P<0. 05),见表 2。 表 1 不同宫颈组织中 TLR3、NF鄄资B、IL鄄1茁 表达 分类 TLR3 - + ++ +++ 阳性率(% ) NF鄄资B - + ++ +++ 阳性率(% ) IL鄄1茁 - + ++ +++ 阳性率(% ) 正常宫颈 0 0 10 10 100 6 14 0 0 0 4 16 0 0 0 CIN 0 10 21 9 75 0 16 24 0 60 0 12 28 0 70 宫颈癌 0 46 12 2 23. 23 0 6 30 24 90 0 6 30 24 90 647 现代妇产科进展 2016 年 09 月第 25 卷第 09 期 Prog Obstet Gynecol,Sep. 2016,Vol郾 25,No郾 09
现代妇产科进展2016年09月第25卷第9期 Prog Obstet Gynecol, Sep.2016,Vol25,Na.09 图1宫颈组织中TR3、NF-KB、IL-1B表达(SPx200 A-C:分别为TLR3在正常宫颈组织、CⅠN、宫颈癌组织中表达;D-F:分别为NFkB在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中表达; G-1:分别为Ⅱ-1B在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中表达 表2TLR3、NF-κB及Ⅱ-1β蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系 分类 TLR3 NF-kB IL-1B 年龄(岁) 41 分期 分级 低中分化 >0.0532617<0.054 <0.052 淋巴结转移 5 >0.055 <0.055 3讨论 ( death domain,DD)。大部分TIRs通过此通路传 在正常健康的细胞中,TRs有着多种功能,包导,即MyD88依赖性信号转导通路。TLRs识别相 括对组织内稳态、细胞死亡和生存的调节。TLRs-应的配体后,TLRs和MyD88相互作用,随后通过 NF-κB信号通路是人体参与炎症及免疫应答的主要DD募集I-l相关激酶(Il-1R- associated kinase,I 部分,也参与了癌变过程。髓系分化因子88( mve- RAK),经由胂瘤坏死因子受体相关因子6( TNF re.- loid differentiation primary response gene88,yD88) lated adaptor molecule6,TRAF6)和泛素化酶E3等 是主要与TLRs相关联的接头蛋白,其羧基端为TR复合体,引起NF-KB、丝裂原活化蛋白酶( mitogen (To/ IL-IR domain)结构域,氨基端为死亡结构域 activated protein kinase,MAPK)和免疫相关基因的转
图 1 宫颈组织中 TLR3、NF鄄资B、IL鄄1茁 表达(SP伊200) A ~ C:分别为 TLR3 在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中表达;D ~ F:分别为 NF鄄资B 在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中表达; G ~ I:分别为 IL鄄1茁 在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中表达 表 2 TLR3、NF鄄资B 及 IL鄄1茁 蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系 分类 n TLR3 + ++ +++ P NF鄄资B + ++ +++ P IL鄄1茁 + ++ +++ P 年龄(岁) 臆50 41 31 8 2 >0. 05 4 21 16 >0. 05 3 22 16 >0. 05 >50 19 15 4 0 >0. 05 2 9 8 >0. 05 3 8 8 >0. 05 分期 I 38 26 10 2 <0. 05 4 22 12 <0. 05 5 23 10 <0. 05 II 22 20 2 0 <0. 05 2 8 12 <0. 05 1 7 14 <0. 05 分级 低鄄中分化 46 33 8 1 >0. 05 3 26 17 <0. 05 4 29 13 <0. 05 高分化 14 13 4 1 >0. 05 3 4 7 <0. 05 2 1 11 <0. 05 淋巴结转移 - 51 40 10 1 >0. 05 5 27 18 <0. 05 5 29 17 <0. 05 + 9 6 2 1 >0. 05 1 3 6 <0. 05 1 1 7 <0. 05 3 讨 论 在正常健康的细胞中,TLRs 有着多种功能,包 括对组织内稳态、细胞死亡和生存的调节。 TLRs鄄 NF鄄资B 信号通路是人体参与炎症及免疫应答的主要 部分,也参与了癌变过程。 髓系分化因子 88 ( mye鄄 loid differentiation primary response gene 88,MyD88) 是主要与 TLRs 相关联的接头蛋白,其羧基端为 TIR (Toll / IL鄄IR domain) 结构域,氨基端为死亡结构域 (death domain,DD)。 大部分 TLRs 通过此通路传 导,即 MyD88 依赖性信号转导通路。 TLRs 识别相 应的配体后,TLRs 和 MyD88 相互作用,随后通过 DD 募集 IL鄄1 相关激酶( IL鄄1R鄄associated kinase, I鄄 RAK),经由肿瘤坏死因子受体相关因子鄄6(TNF re鄄 lated adaptor molecule 6,TRAF鄄6)和泛素化酶 E3 等 复合体,引起 NF鄄资B、丝裂原活化蛋白酶( mitogen鄄 activated protein kinase,MAPK)和免疫相关基因的转 648 现代妇产科进展 2016 年 09 月第 25 卷第 09 期 Prog Obstet Gynecol,Sep. 2016,Vol郾 25,No郾 09
现代妇产科进展2016年09月第25卷第09期 Prog Obstet Gynecol, Sep.2016,Vol25,Na209 录,诱导炎性细胞因子,如Ⅱ6、IL-1、TNFα表达。增殖与凋亡,被称为控制早期基因表达的基因开 此外,通过对MyD88基因敲除小鼠的研究证实,还关(,在清除细菌或病毒感染过程中也发挥着重要 存在非MyD88依赖性信号转导通路,其在TR3传的作用。本研究发现,CN与宫颈癌组中NF-κB阳 导通路中也更为重要。NF-KB涉及到多个复杂的信性表达率明显高于正常组,这提示NFKB异常表达 号传导过程,其异常激活与抑制肿瘤细胞凋亡、促进在CIN与宫颈癌发生中可能起着重要作用。Du 肿瘤发生和发展相关。其下游因子Ⅱ-1β的异常释等2指出,NFκkB阳性表达率与宫颈病变程度密切 放或表达缺失会导致炎症局部病理微环境发生改相关。L等则从细胞系中验证了宫颈癌组织中 变,在抗感染过程中导致炎症慢性化及免疫监视的NFKB表达活性上调。此外,本研究中NKB表达 缺失。免疫活化介导的T3在清除病毒感染中起与宫颈癌临床分期、分级及盆腔淋巴结转移情况具 重要作用。TB3是能识别病毒dRNA或聚肌胞有相关性(P<0.05)。这提示NFAB不仅与宫颈癌 苷酸(po1:C),可通过含有TR结构能诱导干扰发生有关,还可能在癌细胞的侵袭性生长及转移过 素B的接头分子( tir domain-containing adaptor in程中发挥作用但具体作用机制尚不十分清楚。 ducing interferon B,TRF)介导,能激活NFKB和招 IL1又名淋巴细胞活化因子,是NF-kB信号通 募TAN结合激酶( TANK-binding kinasel,路重要的炎症细胞因子,参与机体炎症反应及抗肿 TBK1)1),激发免疫应答的细胞会分泌肿瘤坏死因 瘤等生理过程,主要在细胞免疫激活中发挥调节作 子、白细胞介素(包括IL1B、I6、ⅡL-18等)、一氧化 用。研究表明2-3,宫颈癌HPV感染中是以炎症反 氮(NO)等致炎因子。这些致炎因子能以不同途径应开始,其产物可促进Ⅱ1B的转录和合成,导致 产生细胞毒性或诱导细胞凋亡-1。 IL1β蛋白水平升高。本研究发现,CN与宫颈癌组 本研究发现,正常宫颈、CIN及宫颈癌中TR3 表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.005) 中I-1B阳性表达率明显高于正常组,并与宫颈癌 临床分期、分级及盆腔淋巴结转移情况具有相关性 且与临床分期具有相关性(P<0.05),这与 Aggarwal 等叫研究一致。这种异常表达可能与HPV感染有(P<0.05)。这提示微环境或肿瘤细胞分泌Ⅱ-1B 关。目前认为持续性HPV感染是宫颈癌发生的前可激活炎症反应,并可提高肿瘤侵袭能力并加重局 提,病毒的免疫逃逸是HPV病毒长期持续大量复制部免疫损伤。梁冠盈等研究证实,Ⅱ-1与宫颈癌 的重要原因。TLB3表达降低能引起免疫逃避,从而发生密切相关。同样,海力曼等研究也证实了此 增加HV的持续性损伤,这将有利于HPV的持结论,1B在维吾尔族宫颈鳞癌组中表达高于子宫 续感染及宫颈癌的发生发展。Daud等研究发颈炎组(P<0.05)。 现,在HPV6感染的妇女中,病毒清除与TLR3表达 本研究显示,TR3与NF-KB、I-1B呈明显负相 增加有关,提示TB3表达增加对HPV的清除是必关。可能机制为宫颈癌中NFB通路及其下游表 要的。此外,通过干扰先天免疫反应来降低在宫颈达受其他TLRs调控,其影响程度大于TLR3调控 黏膜TLRs表达,有助于病毒持续性存在(]。此外, Cheng等研究证实,TB4在宫颈癌中高表达,并 TIR3低表达可使肿瘤细胞逃避免疫杀伤作用,从而能激活NFkB信号通路促进免疫抑制因子Ⅱ6等 达到促进宫颈癌发生。但国内外对宫颈癌组织中分泌,从而促进宫颈癌发展。此外,NFkB和ⅡL1B TLR3表达规律的研究结果并不一致。Haim等1)在宫颈癌中表达升高也可能与剌激因子,如病毒及 在维吾尔族妇女正常宫颈组织、CN以及宫颈癌组病毒蛋白、免疫受体或致炎细胞因子等对NFKB的 织中,并未发现TLR3表达有显著差异,TLR3表达直接激活作用有关 与HPV16感染也无明显相关性。郭宇雯等9研究 综上,TLR3在宫颈癌组织中呈明显低表达,提 发现,∏BR3及P16在宫颈癌及CIN组织中的表达较示TR3激动剂可通过刺激TLRs依赖通路、增强宿 正常鳞状上皮均显著提高,TR3与P16表达呈显著主对HPV的防御,以达到治疗目的。然而对于 正相关(r=0.538,P<0.01),与CIN级别相关。此TRs在肿瘤中起主导作用还是共同作用以及对于 外, Decarlo等认为,不典型增生上皮组织中TLR3HPV感染与TRs的相关性尚有待进一步研究。因 表达水平显著升高(P<0.05) 此,深人对TLRs通路在宫颈病变中作用机制的研 NF-KB是TLR3信号转导通路中的关键因子,究,可为宫颈癌的发病机制以及个性化治疗提供新 普遍存在真核细胞中,并作为调节基因,控制细胞的的理论依据。 49
录,诱导炎性细胞因子,如 IL鄄6、IL鄄1、TNF鄄琢 表达。 此外,通过对 MyD88 基因敲除小鼠的研究证实,还 存在非 MyD88 依赖性信号转导通路,其在 TLR3 传 导通路中也更为重要。 NF鄄资B 涉及到多个复杂的信 号传导过程,其异常激活与抑制肿瘤细胞凋亡、促进 肿瘤发生和发展相关。 其下游因子 IL鄄1茁 的异常释 放或表达缺失会导致炎症局部病理微环境发生改 变,在抗感染过程中导致炎症慢性化及免疫监视的 缺失。 免疫活化介导的 TLR3 在清除病毒感染中起 重要作用[9] 。 TLR3 是能识别病毒 dsRNA 或聚肌胞 苷酸(polyI:C) [10] ,可通过含有 TIR 结构能诱导干扰 素 茁 的接头分子( TIR domain鄄containing adaptor in鄄 ducing interferon 茁,TRIF)介导,能激活 NF鄄资B 和招 募 TANK 结 合 激 酶 ( TANK鄄binding kinase1, TBK1) [11] ,激发免疫应答的细胞会分泌肿瘤坏死因 子、白细胞介素(包括 IL鄄1茁、IL鄄6、IL鄄18 等)、一氧化 氮(NO)等致炎因子。 这些致炎因子能以不同途径 产生细胞毒性或诱导细胞凋亡[12-13] 。 本研究发现,正常宫颈、CIN 及宫颈癌中 TLR3 表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P<0. 005), 且与临床分期具有相关性(P<0. 05),这与 Aggarwal 等[14]研究一致。 这种异常表达可能与 HPV 感染有 关。 目前认为,持续性 HPV 感染是宫颈癌发生的前 提,病毒的免疫逃逸是 HPV 病毒长期持续大量复制 的重要原因。 TLR3 表达降低能引起免疫逃避,从而 增加 HPV 的持续性损伤[15] ,这将有利于 HPV 的持 续感染及宫颈癌的发生发展。 Daud 等[16] 研究发 现,在 HPV16 感染的妇女中,病毒清除与 TLR3 表达 增加有关,提示 TLR3 表达增加对 HPV 的清除是必 要的。 此外,通过干扰先天免疫反应来降低在宫颈 黏膜 TLRs 表达,有助于病毒持续性存在[17] 。 此外, TLR3 低表达可使肿瘤细胞逃避免疫杀伤作用,从而 达到促进宫颈癌发生。 但国内外对宫颈癌组织中 TLR3 表达规律的研究结果并不一致。 Hasimu 等[18] 在维吾尔族妇女正常宫颈组织、CIN 以及宫颈癌组 织中,并未发现 TLR3 表达有显著差异,TLR3 表达 与 HPV16 感染也无明显相关性。 郭宇雯等[19] 研究 发现,TLR3 及 P16 在宫颈癌及 CIN 组织中的表达较 正常鳞状上皮均显著提高,TLR3 与 P16 表达呈显著 正相关(rs = 0. 538,P<0. 01),与 CIN 级别相关。 此 外,Decarlo 等[20]认为,不典型增生上皮组织中 TLR3 表达水平显著升高(P<0. 05)。 NF鄄资B 是 TLR3 信号转导通路中的关键因子, 普遍存在真核细胞中,并作为调节基因,控制细胞的 增殖与凋亡,被称为控制早期基因表达的基因开 关[21] ,在清除细菌或病毒感染过程中也发挥着重要 的作用。 本研究发现,CIN 与宫颈癌组中 NF鄄资B 阳 性表达率明显高于正常组,这提示 NF鄄资B 异常表达 在 CIN 与宫颈癌发生中可能起着重要作用。 Du 等[22]指出,NF鄄资B 阳性表达率与宫颈病变程度密切 相关。 Li 等[23]则从细胞系中验证了宫颈癌组织中 NF鄄资B 表达活性上调。 此外,本研究中 NF鄄资B 表达 与宫颈癌临床分期、分级及盆腔淋巴结转移情况具 有相关性(P<0. 05)。 这提示 NF鄄资B 不仅与宫颈癌 发生有关,还可能在癌细胞的侵袭性生长及转移过 程中发挥作用,但具体作用机制尚不十分清楚。 IL鄄1 又名淋巴细胞活化因子,是 NF鄄资B 信号通 路重要的炎症细胞因子,参与机体炎症反应及抗肿 瘤等生理过程,主要在细胞免疫激活中发挥调节作 用。 研究表明[24-25] ,宫颈癌 HPV 感染中是以炎症反 应开始,其产物可促进 IL鄄1茁 的转录和合成,导致 IL鄄1茁 蛋白水平升高。 本研究发现,CIN 与宫颈癌组 中 IL鄄1茁 阳性表达率明显高于正常组,并与宫颈癌 临床分期、分级及盆腔淋巴结转移情况具有相关性 (P<0. 05)。 这提示微环境或肿瘤细胞分泌 IL鄄1茁 可激活炎症反应,并可提高肿瘤侵袭能力并加重局 部免疫损伤。 梁冠盈等[26] 研究证实,IL鄄1 与宫颈癌 发生密切相关。 同样,海力曼等[27] 研究也证实了此 结论,IL鄄1茁 在维吾尔族宫颈鳞癌组中表达高于子宫 颈炎组(P<0. 05)。 本研究显示,TLR3 与 NF鄄资B、IL鄄1茁 呈明显负相 关。 可能机制为宫颈癌中 NF鄄资B 通路及其下游表 达受其他 TLRs 调控,其影响程度大于 TLR3 调控。 Cheng 等[28] 研究证实,TLR4 在宫颈癌中高表达,并 能激活 NF鄄资B 信号通路,促进免疫抑制因子 IL鄄6 等 分泌,从而促进宫颈癌发展。 此外,NF鄄资B 和 IL鄄1茁 在宫颈癌中表达升高也可能与刺激因子,如病毒及 病毒蛋白、免疫受体或致炎细胞因子等对 NF鄄资B 的 直接激活作用有关。 综上,TLR3 在宫颈癌组织中呈明显低表达,提 示 TLR3 激动剂可通过刺激 TLRs 依赖通路、增强宿 主对 HPV 的防御, 以达到治疗目的。 然而对于 TLRs 在肿瘤中起主导作用还是共同作用以及对于 HPV 感染与 TLRs 的相关性尚有待进一步研究。 因 此,深入对 TLRs 通路在宫颈病变中作用机制的研 究,可为宫颈癌的发病机制以及个性化治疗提供新 的理论依据。 649 现代妇产科进展 2016 年 09 月第 25 卷第 09 期 Prog Obstet Gynecol,Sep. 2016,Vol郾 25,No郾 09
现代妇产科进展2016年09月第25卷第9期 Prog Obstet Gynecol, Sep.2016,Vol25,Na.09 参考文献 [15]张倩,张淑兰.TOLL样受体与宫颈病变相关研究进展 [J].现代妇产科进展,2016,25(7):179-181 [1] Akinyemiju TF. Socio-economic and health access deter- [16 Daud Il, Scott ME, Ma Y, et al. Association between toll- minants of breast and cervical cancer screening in low come countries: analysis of the World Health Survey[J 16 persistence[ J]. Int J Cancer, 2011, 128(4): 879-886 PLoS One,2012,7(11):e48834 [17 Zhou Q, Zhu K, Cheng HToll-like [2 Ginsberg GM, Lauer JA, Zelle S, et al. Cost effectivenes papillomavirus infection J]. Arch Immunol Ther Exp ategies to combat breast. cervical and colorectal cancer ( Warsz),2013,61(3):203-215 in sub-Saharan Africa and South East Asia: mathematical [18 Hasimu A, Ge L, Li QZ, et al. Expressions of Toll-like re- modelling study[J]. BMJ, 2012, 344: e614 ceptors 3, 4, 7, and 9 in cervical lesions and their correla- [3] Shuai HL, Luo X, Yan RL, et al. XRCCI polymorphisms on with HPV16 infection in Uighur women J]. Chin J are associated with cervical cancer risk and response to chemotherapy: a systematic review and meta-analysis[J].[19]郭宇雯,吴正升,张和平,等.子宫颈上皮内瘤变及子 Asian Pac J Cancer Prev, 2012, 13( 12): 6423-6427 宫颈癌组织中p16和TLR3的表达及意义[冂]临床 [4 Gocze K, Gombos K, Juhasz K, et al. Unique microrNA 与实验病理学杂志,2015,31(5):502-505 expression profiles in cervical cancer[ J]. Anticancer Res, [20] Decarlo CA, Rosa B, Jackson R, et al. Toll-like receptor 2013,33(6):2561-2567 transcriptome in the HPV-positive cervical cancer micro- [5] Takeda K, Kaisho T, Akira S. Toll-like receptors[J].Annu environment[J]. Clin Dev Immunol, 2012, 2012: 785825 Rev immunol,2003,21:335-376 [21]邢飞跃,赵克森,姜勇.NF-κB的信号通路与阻断策略 [6 Kawai T, Akira S. The role of pattern-recognition receptors [J].中国病理生理杂志,2003,19(6):849-855 [22] Du CX, Wang Y. Expression of Immunol,2010,11(5):373-384 their correlation with human papillomavirus infection in [7] Takeda K, Akira S. Toll-like receptors in innate immunity cervical carcinoma[ J]. Eur J Gynaecol Oncol, 2012, 33 [J]. Int immunol,2005,17(1):1-14 3):274-277 [8 Basith S, Manavalan B, Yoo TH, et al. Roles of toll-like re- [23 Li J, Jia H, Xie L, et al. Association of constitutive nucle- ceptors in cancer: a double-edged sword for defense and ar factor-kappaB activation with aggressive aspects offense[ J]. Arch Pharm Res, 2012, 35(8): 1297-1316 poor prognosis in cervical cancer [J]. Int J Gynecol [9] Matsumoto M, Oshiumi H, Seya T. Antiviral responses in- Cancer,2009,19(8):1421-426 duced by the TLR3 pathway [J]. Rev Med Virol, 2011, 21 [24 Xu J, Yin Z, Cao S, et al. Systematic review and meta-a- (2):67-77 nalysis on the association between IL-1B polymorphisms [10 Skold AE, Hasan M, Vargas L, et al. Single-stranded and cancer risk[J]. PLoS One, 2013, 8(5): e63654 DNA oligonucleotides inhibit TLR3-mediated responses [25 Haq AU, Rinehart JJ, Maca RD The effect of gamma in- in human monocvte-derived dendritic cells and in vivo terferon on IL-I secretion of in vitro differentiated human in cynomolgus macaques [J]. Blood, 2012, 120(4) macrophages[J]. J Leukoc Biol, 1985, 38(6): 735-746 768-777 [26]梁冠盈,迟秋君,傅瑶,等HPV感染及ⅡL-1B、Ⅱ6 [11] Meylan E, Tschopp J. Toll-like receptors and RNA heli- I13的表达与子宫颈癌临床相关性分析[J]哈尔 cases: two parallel ways to trigger antiviral responses 滨医科大学学报,2013,47(6):490494 ol cell2006,22(5):561-569 [27]海力曼·衣拉洪,贾索尔·肖克热提,阿力木·伊力 [12 Qian N, Chen X, Han S, et al. Circulating IL-lbeta lev- 亚斯,等.维吾尔族妇女子宫颈病变中CIGF、I-1B els, polymorphisms of Il-l B, and risk of cervical cancer Agr和Adi-poRl表达与HPV16感染的相关性[J]临 in Chinese women[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2010 床与实验病理学杂志,2014,30(8):863-867 136(5):709-716 [28 Cheng YX. Qi XY, Huang JL, et al. Toll-like receptor 4 [13] Muraguchi A, Hirano T, Tang B, et al. The es signaling promotes the immunosuppressive cytokine pro of B cell stimulatory factor 2( BSF-2/IL-6 duction of human cervical cancer[J]. Eur J Gynaecol minal differentiation of B cells[J]. J Exp Med Oncol,2012,33(3):291-294 2):332-344 (收稿日期20160509) [14] Aggarwal I, Misra s, Guleria c,etal. Characterization of第一作者简介:张倩(1989-),女,中国医科大学附属盛京医 Toll-like receptor transcriptome in squamous cell carcino-院妇产科硕士研究生,现就职于中国人民解放军第202医院 se-control study[门]. Gynecol Oncol,生殖医学中心。主要研究方向:妇科学。 2015,138(2):358-362 650
参 考 文 献 [1] Akinyemiju TF. Socio鄄economic and health access deter鄄 minants of breast and cervical cancer screening in low鄄in鄄 come countries:analysis of the World Health Survey[ J]. PLoS One,2012,7(11):e48834 [2] Ginsberg GM,Lauer JA,Zelle S,et al. Cost effectiveness of strategies to combat breast,cervical,and colorectal cancer in sub鄄Saharan Africa and South East Asia:mathematical modelling study[J]. BMJ,2012,344:e614 [3] Shuai HL,Luo X,Yan RL,et al. XRCC1 polymorphisms are associated with cervical cancer risk and response to chemotherapy:a systematic review and meta鄄analysis[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2012,13(12):6423鄄6427 [4] Gocze K,Gombos K,Juhasz K,et al. Unique microRNA expression profiles in cervical cancer[J]. Anticancer Res, 2013,33(6):2561鄄2567 [5] Takeda K,Kaisho T,Akira S. Toll鄄like receptors[J]. Annu Rev Immunol,2003,21:335鄄376 [6] Kawai T,Akira S. The role of pattern鄄recognition receptors in innate immunity:update on Toll鄄like receptors[ J]. Nat Immunol,2010,11(5):373鄄384 [7] Takeda K,Akira S. Toll鄄like receptors in innate immunity [J]. Int Immunol,2005,17(1):1鄄14 [8] Basith S,Manavalan B,Yoo TH,et al. Roles of toll鄄like re鄄 ceptors in cancer: a double鄄edged sword for defense and offense[J]. Arch Pharm Res,2012,35(8):1297鄄1316 [9] Matsumoto M,Oshiumi H,Seya T. Antiviral responses in鄄 duced by the TLR3 pathway[J]. Rev Med Virol,2011,21 (2):67鄄77 [10] Skold AE, Hasan M, Vargas L, et al. Single鄄stranded DNA oligonucleotides inhibit TLR3鄄mediated responses in human monocyte鄄derived dendritic cells and in vivo in cynomolgus macaques [ J]. Blood, 2012, 120 ( 4 ): 768鄄777 [11] Meylan E,Tschopp J. Toll鄄like receptors and RNA heli鄄 cases: two parallel ways to trigger antiviral responses [J]. Mol Cell,2006,22(5):561鄄569 [12] Qian N,Chen X,Han S,et al. Circulating IL鄄1beta lev鄄 els,polymorphisms of IL鄄1B,and risk of cervical cancer in Chinese women[ J]. J Cancer Res Clin Oncol,2010, 136(5):709鄄716 [13] Muraguchi A,Hirano T,Tang B,et al. The essential role of B cell stimulatory factor 2 (BSF鄄2 / IL鄄6) for the ter鄄 minal differentiation of B cells[J]. J Exp Med,1988,167 (2):332鄄344 [14] Aggarwal R,Misra S,Guleria C,et al. Characterization of Toll鄄like receptor transcriptome in squamous cell carcino鄄 ma of cervix:A case鄄control study[ J]. Gynecol Oncol, 2015,138(2):358鄄362 [15] 张倩,张淑兰. TOLL 样受体与宫颈病变相关研究进展 [J]. 现代妇产科进展,2016,25(7):179鄄181 [16] Daud II,Scott ME,Ma Y,et al. Association between toll鄄 like receptor expression and human papillomavirus type 16 persistence[J]. Int J Cancer,2011,128(4):879鄄886 [17] Zhou Q,Zhu K,Cheng H. Toll鄄like receptors in human papillomavirus infection [ J]. Arch Immunol Ther Exp (Warsz),2013,61(3):203鄄215 [18] Hasimu A,Ge L,Li QZ,et al. Expressions of Toll鄄like re鄄 ceptors 3,4,7,and 9 in cervical lesions and their correla鄄 tion with HPV16 infection in Uighur women[ J]. Chin J Cancer,2011,30(5):344鄄350 [19] 郭宇雯,吴正升,张和平,等. 子宫颈上皮内瘤变及子 宫颈癌组织中 p16 和 TLR3 的表达及意义[ J]. 临床 与实验病理学杂志,2015,31(5):502鄄505 [20] Decarlo CA,Rosa B,Jackson R,et al. Toll鄄like receptor transcriptome in the HPV鄄positive cervical cancer micro鄄 environment[J]. Clin Dev Immunol,2012,2012:785825 [21] 邢飞跃,赵克森,姜勇. NF鄄资B 的信号通路与阻断策略 [J]. 中国病理生理杂志,2003,19(6):849鄄855 [22] Du CX,Wang Y. Expression of P鄄Akt,NFkappaB and their correlation with human papillomavirus infection in cervical carcinoma[ J]. Eur J Gynaecol Oncol,2012,33 (3):274鄄277 [23] Li J,Jia H,Xie L,et al. Association of constitutive nucle鄄 ar factor鄄kappaB activation with aggressive aspects and poor prognosis in cervical cancer [ J ]. Int J Gynecol Cancer,2009,19(8):1421鄄1426 [24] Xu J,Yin Z,Cao S,et al. Systematic review and meta鄄a鄄 nalysis on the association between IL鄄1B polymorphisms and cancer risk[J]. PLoS One,2013,8(5):e63654 [25] Haq AU,Rinehart JJ,Maca RD. The effect of gamma in鄄 terferon on IL鄄1 secretion of in vitro differentiated human macrophages[J]. J Leukoc Biol,1985,38(6):735鄄746 [26] 梁冠盈,迟秋君,傅瑶,等. HPV 感染及 IL鄄1茁、IL鄄6、 IL鄄13 的表达与子宫颈癌临床相关性分析[ J]. 哈尔 滨医科大学学报,2013,47(6):490鄄494 [27] 海力曼·衣拉洪,贾索尔·肖克热提,阿力木·伊力 亚斯,等. 维吾尔族妇女子宫颈病变中 CTGF、IL鄄1茁、 Agr 和 Adi鄄poR1 表达与 HPV16 感染的相关性[ J]. 临 床与实验病理学杂志,2014,30(8):863鄄867 [28] Cheng YX,Qi XY,Huang JL,et al. Toll鄄like receptor 4 signaling promotes the immunosuppressive cytokine pro鄄 duction of human cervical cancer [ J]. Eur J Gynaecol Oncol,2012,33(3):291鄄294 (收稿日期 2016鄄05鄄09) 第一作者简介:张倩(1989鄄),女,中国医科大学附属盛京医 院妇产科硕士研究生,现就职于中国人民解放军第 202 医院 生殖医学中心。 主要研究方向:妇科学。 650 现代妇产科进展 2016 年 09 月第 25 卷第 09 期 Prog Obstet Gynecol,Sep. 2016,Vol郾 25,No郾 09