（二）PCR扩增PCR扩增反应体系8X反应组分原浓度终浓度反应体积（10μL）3.0524. 4ddH20 (μL)一一10XBuffer810X1X1. 0（不含Mg2+)254MgCl2 (mmo1/L)1.250.5100. 20.21.6dNTPs (mmol/L)220. 05 U0. 25Tag酶U/μL16引物(μmol/L)1.250.252. 050153. 0DNA (ng/L)6
6 （二）PCR扩增 反应组分 原浓度 终浓度 反应体积（10L） 8× ddH2O（L） － － 3.05 24.4 10×Buffer （不含Mg2+） 10× 1× 1.0 8 MgCl2(mmol/L) 25 1.25 0.5 4 dNTPs(mmol/L) 10 0.2 0.2 1.6 Tag酶U/L 2 0.05 U 0.25 2 引物(mol/L) 1.25 0.25 2.0 16 DNA(ng/L) 50 15 3.0 - • PCR扩增反应体系 PCR扩增反应体系
简化PCR扩增反应体系10 X原浓度反应组分终浓度反应体积（15μL）4.5ddH20 (μL)-一2MIX7.50. 05 U1. 252. 0引物（μmol/L）0. 2550151. 0DNA (ng/L)7
7 反应组分 原浓度 终浓度 反应体积（15L） 10× ddH2O（L） － － 4.5 MIX 2 0.05 U 7.5 引物(mol/L) 1.25 0.25 2.0 DNA(ng/L) 50 15 1.0 - • PCR扩增反应体系 简化PCR扩增反应体系
反应程序预变性：94℃5min;变性：94℃30s，退火：50-68℃（依据引物的退火温度改变）45s，延伸：72℃60s，进行30次循环；终延伸：72℃10min。扩增产物于4℃保存8
8 反应程序 预变性：94℃ 5min； 变 性：94℃30s， 退 火：50-68℃（依据引物的退火温度改变） 45s， 延 伸：72℃60s，进行30次循环； 终延伸：72℃ 10min。 扩增产物于4℃保存