单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院
单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院
抗体 。抗体，是一种由浆细胞 (效应B细胞)分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 Ba公百 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 忽基端 越变区、 轻链 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面[1]。抗体能识别特 灯变区 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 牧链区 外体指合区 抗原。 0晴基 磷内二陈经 破基蜘
抗体，是一种由浆细胞 （效应B细胞）分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面 [1] 。抗体能识别特 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 抗原
单克隆抗体简介 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 0 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术 。获得1984年诺贝尔医学奖
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术 获得1984年诺贝尔医学奖
制备过程 。1.免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。 。2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞
1. 免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。 2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞
制备过程 。3选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌昤磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖
3.选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖