三、超临界流体色谱的流动相和改性剂 (一)流动相 。SFC的流动相为超临界流体。超临界流体的主要特点是在不 同压力下对各种样品有不同的溶解能力。其溶解度随超临界 流体密度的增加而增加。当两组分的溶解度常数越接近 时，其互溶性就越好。有人研究认为，几种常用的超临界 流体的溶解能力在相同的压力条件下顺序是乙烷<二氧化碳< 氧化亚氮<三氟甲烷，在相同条件下其分离能力是：<二氧 化碳<氧化亚氮<三氟甲烷≈乙烷。 对于SFC流动相的选择应综合考虑。除溶解性能外，还要与 检测器相适应，CO2是最常用的流动相。其临界温度低、压 力适中，容易操作，相对便宜，无毒无嗅，安全性好，且在 190nm以上无紫外吸收
三、超临界流体色谱的流动相和改性剂 （一）流动相 SFC的流动相为超临界流体。超临界流体的主要特点是在不 同压力下对各种样品有不同的溶解能力。其溶解度随超临界 流体密度的增加而增加。当两组分的溶解度常数越接近 时，其互溶性就越好。有人研究认为，几种常用的超临界 流体的溶解能力在相同的压力条件下顺序是乙烷 <二氧化碳 < 氧化亚氮 <三氟甲烷，在相同条件下其分离能力是：＜二氧 化碳＜氧化亚氮＜三氟甲烷≈乙烷。 对于SFC流动相的选择应综合考虑。除溶解性能外，还要与 检测器相适应，CO2是最常用的流动相。其临界温度低、压 力适中，容易操作，相对便宜，无毒无嗅，安全性好，且在 190nm以上无紫外吸收
(二)改性剂。 在SFC中，弱极性或非极性超临界流体流动相如CO2,对于一些极性化 合物的溶解能力较差。为了加强其对极性溶质的溶解和洗脱能力，常常向其 中加入一定比例的极性溶剂称为改性剂，加入的量一般为1%-5%，以甲醇 最常用，其次是其他脂肪醇，表中列出了部分适于二氧化碳的改性剂及应用 特性。 表常用C0,改性剂 C0,改性剂 检测方法 C0,改性剂 检测方法 UVD MS 脂肪 UV 甲醇 FIDC(用量应少 二甲基亚砜 乙 UV MS 于1%) 二氧甲烷 UV MS 脂肪醇 UV MS 甲醇 UV MS FID 四氢呋喃 UV MS 二氧化碳 UV MS FID 2-基乙醇 UV 水 UV MS FID 在分离酸性或碱性化合物时，也可以向CO2流动相中加入酸或碱，使其峰形变锐
（二）改性剂。 在SFC中，弱极性或非极性超临界流体流动相如CO2，对于一些极性化 合物的溶解能力较差。为了加强其对极性溶质的溶解和洗脱能力，常常向其 中加入一定比例的极性溶剂称为改性剂，加入的量一般为1%-5%，以甲醇 最常用，其次是其他脂肪醇，表中列出了部分适于二氧化碳的改性剂及应用 特性。 表 常用CO2改性剂 CO2改性剂 检测方法 CO2改性剂 检测方法 甲醇 UVD MS FIDC（用量应少 于1%） 脂肪 二甲基亚砜 乙 二氧甲烷 UV UV UV MS UV MS 脂肪醇 UV MS 甲醇 UV MS FID 四氢呋喃 UV MS 二氧化碳 UV MS FID 2- 基乙醇 UV 水 UV MS FID 在分离酸性或碱性化合物时，也可以向CO2流动相中加入酸或碱，使其峰形变锐
四、应用与示例 超临界流体色谱法已被广泛应用于天然物，药物，表面活性剂，高 聚物，农药，炸药，火箭推进剂等物质的分离与分析 1.超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量 牛膝制剂中含有的齐墩果酸不易挥发，且含有羟基、羟基等相性 基团，用GC法测定须衍生化处理后，才能测定，又因其结构中无发 色团，本自无紫外吸收，也不易被激发产生荧光，若用HPLC测定 无法用常规检测器检测，而用SFC可直接进样测定，由于SFC对GC 及HPLC的检测器可兼容使用，分辨率也好于HPLC。 色谱条件色谱柱：石英毛细管交联柱(10m×50Mm,D),固 定相：SB-Cyanopropyl-50:液膜厚度：0.25Mm;流动相：CO2 (99.995%):柱温：90℃；检测点：FID,325℃；压力程序： 15.20MPa,保持7min后以0.81MPa/min升至20.26MPa,再以 1.22MPa/min升至35.45MPa,分流进样2M,分流比100：15，补充气： 氮气，纸建.0.5 cm/min,衰减8
四、应用与示例 超临界流体色谱法已被广泛应用于天然物，药物，表面活性剂，高 聚物，农药，炸药，火箭推进剂等物质的分离与分析. 1.超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量 牛膝制剂中含有的齐墩果酸不易挥发，且含有羟基、羟基等相性 基团，用GC法测定须衍生化处理后，才能测定，又因其结构中无发 色团，本自无紫外吸收，也不易被激发产生荧光，若用HJPLC测定 无法用常规检测器检测，而用SFC可直接进样测定，由于SFC对GC 及HPLC的检测器可兼容使用，分辨率也好于HPLC。 色谱条件 色谱柱：石英毛细管交联柱（10m×50Mm，ID），固 定相：SB-Cyanopropyl-50；液膜厚度：0.25Mm；流动相：CO2 （99.995%）；柱温：90℃；检测点：FID，325℃；压力程序： 15.20MPa，保持7min后以0.81MPa/min升至20.26MPa,再以 1.22MPa/min升至35.45MPa,分流进样2Ml，分流比100:15，补充气： 氮气，纸建.0.5cm/min，衰减8
标准溶液的配制，取齐墩果酸对照品适量，加二氯甲烷溶 解，并稀释成浓度为1.921mg/ml的标准溶液。 标准曲线的绘制精密量取齐墩果酸标准液(1.921mg/ml) 0.4,0.8,1.2,1.6,2.0及2.6ml,芬别置平底烧瓶甲，挥 去二氯甲烷后，各加2mol心盐酸20ml后按样盒芬析方法操 作，以齐墩果酸与内标的峰面积比对进样浓度进行回归，其 ▣归方程主：Y=1.7018×10-3+0.3392X、y=0.9998。 t 样品测定精密称取天麻丸（胶囊内药粉）约1g,每加 2mol/L,HCL20ml,超声振荡15分钟，加热回流水解2小时， 金2索落高堡手中用》 加 (2~3ml)冲洗滤纸，同收并挥干氯仿，备用。测定前精密 加入1m二氯甲烷及1ml甲羟孕酮内标准溶液，溶解后进样测 雾喜聚装碧0雀暖男的 方程，计 94.82%,RSD为2.51%
标准溶液的配制，取齐墩果酸对照品适量，加二氯甲烷溶 解，并稀释成浓度为1.921mg/ml的标准溶液。 标准曲线的绘制 精密量取齐墩果酸标准液（1.921mg/ml ） 0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 及2.6ml，分别置平底烧瓶中，挥 去二氯甲烷后，各加2mol/L盐酸20ml 后按样品分析方法操 作，以齐墩果酸与内标的峰面积比对进样浓度进行回归，其 回归方程主：Y=1.7018 ×10-3+0.3392X、γ=0.9998 。 样品测定 精密称取天麻丸（胶囊内药粉）约1g，每加 2mol/L，HCL20ml,超声振荡15分钟，加热回流水解 2小时， 冷却后滤过，弃去滤液，滤液用蒸馏水洗至中性，烘干，加 氯仿20ml振摇后水浴回流 1小时，趁热滤过，用少量氯仿 （2~3ml）冲洗滤纸，回收并挥干氯仿，备用。测定前精密 加入1ml二氯甲烷及1ml甲羟孕酮内标准溶液，溶解后进样测 定，计算齐墩果酸与内标的峰面积比，代入标准曲线的回归 方程，计算齐墩果酸含量，得含量为0.126%，回收率为 94.82%，RSD 为2.51%
2.聚苯醚低聚物的分析 色谱柱：10m×63μmi.d. 毛细管柱， 固定相：键合二甲基聚硅氧烷： 流动相：C02;柱温：120C: 程序升压； 1212 22 /MPa 图 SFC分离聚苯醚齐聚物的色谐
2.聚苯醚低聚物的分析 色谱柱：10m× 63μm i.d. 毛细管柱， 固定相：键合二甲基聚硅氧烷； 流动相：CO 2 ；柱温：120 °C； 程序升压；