色谱柱 ①填充柱 填充柱与HPLC柱相似,基于分配平衡实现分离,柱长可达 25cm,分离柱内径0.5-4.6mm。使用粒径为3-10um的填料 填充。如硅胶、-NH2、-CN及C18、C8等化学键合相均可用 于SFC。其中以极性填料的分离效果更好。SFC在手性化合 物的分离上效果优于HPLC。 。在实际操作中,往往会因压力变化而产生较大的柱压降,使 柱入、出口处的保留时间有很大差异,所以一般采用高于超 临界压力20%左右的压力以减小影响。在填料的选择上也要 注意与所分析的样品相适应,如分析极性或碱性化合物时, 填料覆盖度小,会产生不对称峰。若使用“封端”填料则会得 到改善
色谱柱 ①填充柱 填充柱与HPLC柱相似,基于分配平衡实现分离,柱长可达 25cm,分离柱内径0.5-4.6mm。使用粒径为3-10µm的填料 填充。如硅胶、-NH2 、-CN 及C18 、C8等化学键合相均可用 于SFC。其中以极性填料的分离效果更好。SFC在手性化合 物的分离上效果优于HPLC 。 在实际操作中,往往会因压力变化而产生较大的柱压降,使 柱入、出口处的保留时间有很大差异,所以一般采用高于超 临界压力20%左右的压力以减小影响。在填料的选择上也要 注意与所分析的样品相适应,如分析极性或碱性化合物时, 填料覆盖度小,会产生不对称峰。若使用 “封端 ”填料则会得 到改善
填充柱在重现性、载样量等方面要优于毛细管柱, 操作简便,也有用微填充柱的,将3-10μ的填料 填充到内径几个毫米或更小的毛细管柱中。 ②毛细管柱 ÷较长用的填充毛细管柱内径≤0.5mm,柱长为10 30mm;开管毛细管柱主要是内径为50-100μm化 学交连的各种硅氧烷柱或其它类型的交连柱。 义 SFC色谱柱必须借助柱箱以实现精确的温度控制, 范围可以从室温至450°C,同时配低温控制系统, 可在-50℃以下工作
填充柱在重现性、载样量等方面要优于毛细管柱, 操作简便,也有用微填充柱的,将3-10μm的填料 填充到内径几个毫米或更小的毛细管柱中。 ②毛细管柱 较长用的填充毛细管柱内径≤0.5mm,柱长为10- 30mm;开管毛细管柱主要是内径为50-100μm化 学交连的各种硅氧烷柱或其它类型的交连柱。 SFC色谱柱必须借助柱箱以实现精确的温度控制, 范围可以从室温至450°C,同时配低温控制系统, 可在-50℃以下工作
主要部件 (3)流动相 SFC的流动相:超临界流体;CO2、N,O、NH? CO,应用最广泛;无色、无味、无毒、易得、对各类有机 物溶解性好,在紫外光区无吸收;缺点:极性太弱;加少量甲 醇等改性: (4)检测器 可采用液相色谱检测器,也可采用气相色谱的FD检测器
主要部件 (3)流动相 SFC的流动相:超临界流体;CO2、N2O、NH3 CO2应用最广泛;无色、无味、无毒、易得、对各类有机 物溶解性好,在紫外光区无吸收;缺点:极性太弱;加少量甲 醇等改性; (4)检测器 可采用液相色谱检测器,也可采用气相色谱的FID检测器
①使用气相色谱检测器,以FD为多用,应用 时可将色谱柱的流出物分流,部分流出物通 过限流器变为气态进入检测器,若用FID检测 时,流动相中不能加入改进剂,否则改进剂 本身将给出信号干扰测定,FID对小分子量化 合物可得到很好的结果,对分子量大的化合 物常得不到单峰,而是一簇峰。如把检测器 加热可使分子量大于2000的化合物获得满意 的分离。 在SFC中也可以使用氨磷检测器(NPD) 火焰光度检测器(FPD)等
①使用气相色谱检测器,以FID为多用,应用 时可将色谱柱的流出物分流,部分流出物通 过限流器变为气态进入检测器,若用FID检测 时,流动相中不能加入改进剂,否则改进剂 本身将给出信号干扰测定,FID对小分子量化 合物可得到很好的结果,对分子量大的化合 物常得不到单峰,而是一簇峰。如把检测器 加热可使分子量大于2000的化合物获得满意 的分离。 在SFC中也可以使用氮磷检测器(NPD)、 火焰光度检测器(FPD)等
②使用液相色谱检测器。在进入检测器之前 应将超临界状态转为液态,可增加检测的灵 敏度,使谱带变窄,而且可以在室温下操 作,UVD是用改性剂流动相的填充柱SFC的 最常用的检测方法。要求检测器必须耐高压。 如使用毛细管柱,UVD的流通池可由一段熔 融石英毛细管构成,内容积在200nl左右,这 样不会影响柱效;荧光检测器(FD)也可以 如此应用。对于填充柱,蒸发光散射检测器 也是一种常用的通用检测器
②使用液相色谱检测器。在进入检测器之前 应将超临界状态转为液态,可增加检测的灵 敏度,使谱带变窄,而且可以在室温下操 作,UVD是用改性剂流动相的填充柱SFC 的 最常用的检测方法。要求检测器必须耐高压。 如使用毛细管柱,UVD的流通池可由一段熔 融石英毛细管构成,内容积在200nl左右,这 样不会影响柱效;荧光检测器(FD)也可以 如此应用。对于填充柱,蒸发光散射检测器 也是一种常用的通用检测器