减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌 酵母菌泛素依赖型蛋白降解系统的编码基因 酵母菌共有四个泛素编码基因: UB/1编码泛素羧基延伸蛋白52(CEP52)对数生长期表达稳定期关闭 UB/2编码泛素-羧基延伸蛋白52(CEP52)对数生长期表达稳定期关闭 UB/3编码泛素-羧基延伸蛋白76(CEP76)对数生长期表达稳定期关闭 UB/4编码泛素五聚体 对数生长期关闭稳定期表达 酵母菌共有七个泛素连接酶基因: UBC1、UBC2、UBC3、UBC4、UBC5、UBC6、UBc7
减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌 酵母菌泛素依赖型蛋白降解系统的编码基因 酵母菌共有四个泛素编码基因： UBI 1 编码泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52） 对数生长期表达 稳定期关闭 UBI 2 编码泛素-羧基延伸蛋白52（CEP52） 对数生长期表达 稳定期关闭 UBI 3 编码泛素-羧基延伸蛋白76（CEP76） 对数生长期表达 稳定期关闭 UBI 4 编码泛素五聚体 对数生长期关闭 稳定期表达 酵母菌共有七个泛素连接酶基因： UBC 1、UBC 2、UBC 3、UBC 4、UBC 5、UBC 6、UBC 7
减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌 泛素降解途径衰减的酿酒酵母 UB/4缺陷型: 在酿酒酵母菌中,泛素主要由UB/4基因表达,UB/4突变株能 正常生长,但细胞内游离泛素分子的浓度比野生株要低得多, 因此∪B/4缺陷突变株是外源基因表达理想的受体 UBA1缺陷型: UBA1编码泛素激活酶E1,UBA1突变株是致死性的,但其等位 基因缺陷是非致死性的,而且也能削弱泛素介导的蛋白降解 Ubc4-ubc5双突变型: 七个泛素连接酶基因的突变对衰减蛋白降解作用同样有效
减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌 泛素降解途径衰减的酿酒酵母 在酿酒酵母菌中，泛素主要由UBI 4基因表达，UBI 4 -突变株能 UBI 4缺陷型： 正常生长，但细胞内游离泛素分子的浓度比野生株要低得多， 因此UBI 4缺陷突变株是外源基因表达理想的受体 UBA 1缺陷型： UBA1编码泛素激活酶E1，UBA1突变株是致死性的，但其等位 基因缺陷是非致死性的，而且也能削弱泛素介导的蛋白降解 Ubc4 - ubc5 双突变型： 七个泛素连接酶基因的突变对衰减蛋白降解作用同样有效
7酵母基因工程 C酵母菌的载体系统 ●酵母菌中的野生型质粒 ●酵母菌克隆表达质粒的构建
C 酵母菌的载体系统 7 酵母基因工程 酵母菌克隆表达质粒的构建 酵母菌中的野生型质粒
酵母菌中的野生型质粒 酿酒酵母中的2μ环状质粒 REP1 FLP 几乎所有的酿酒酵母中都含有2双链 R 环状质粒,拷贝数达50至100个。 RAF Rs反向重复序列,600bp,重组 on R FLP编码产物驱动R的同源重组 STB REP2 尺E尸编码产物控制质粒的稳定性 同源重组 STB REP的结合位点 接合酵母属中的pSR1和pSB1,以及 克鲁维酵母属中的pKD1等均与2u质 B 粒类似
酵母菌中的野生型质粒 酿酒酵母中的2m环状质粒 几乎所有的酿酒酵母中都含有2m双链 同源重组 REP1 RAF STB ori REP2 FLP IR IR A B 环状质粒，拷贝数达50至100个。 IRs 反向重复序列，600 bp，重组 FLP 编码产物驱动IRs的同源重组 REP 编码产物控制质粒的稳定性 STB REP的结合位点 接合酵母属中的pSR1和pSB1，以及 克鲁维酵母属中的pKD1等均与2m质 粒类似