第四章食品添加剂含量的检测 实验一苯甲酸、山梨酸含量的检测 【、气相色谱法 一、目的与要求 1、了解气相色谱仪的基本原理及分析流程。 2、掌握气相色谱分析法操作技术。 3、掌握外标法定量的方法。 二、原理 样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，经浓缩后，用附氢火焰离子化检测器的气相 色谱仪进行分离测定，用外标法与标准系列比较定量。 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)气相色谱仪，带有氢火焰离子化检测器： (2)具塞量简： (3)10mL具塞刻度试管或10mL容量瓶： (4)常用玻璃仪器： 2、试剂： (1)乙醚：不含过氧化物。 (2)石油醚：沸程30~60℃。 (3)盐酸(1+1)： (4)石油醚一乙涨(3+1)混合液 (5)氯化钠酸性溶液(40g几)：于氯化钠溶液(40g几)中加少量盐酸(1+1)酸化 (6)无水 酸钠 分析纯)。 (7)苯甲酸、山梨酸标准贮备液： 精密称取苯甲酸、山梨酸各0.2000g,置于100mL容量瓶中，用石油醚一乙醚(3+1) 混合溶剂溶解后并定容至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于2mg苯甲酸或山梨酸。 (8)材料：饮料 四、测定步骤 1、样品的提取： 吸取10.00mL均匀饮料（如样品中含有二氧化碳，先加热除去），放入150mL分液漏斗中， 加1：1盐酸2mL,用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另 个25mL带塞量筒中， 合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性 40gL)洗涤两次，静止 15min,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确 吸取5.0mL乙酰提取液于10mL带塞离心管中，置40℃的水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙 醚(3+1)混合溶剂溶解残渣，密塞保存备用
第四章 食品添加剂含量的检测 实验一 苯甲酸、山梨酸含量的检测 Ⅰ、气相色谱法 一、目的与要求 1、了解气相色谱仪的基本原理及分析流程。 2、掌握气相色谱分析法操作技术。 3、掌握外标法定量的方法。 二、原理 样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，经浓缩后，用附氢火焰离子化检测器的气相 色谱仪进行分离测定，用外标法与标准系列比较定量。 三、仪器与试剂 1、 仪器 （1）气相色谱仪，带有氢火焰离子化检测器； （2）具塞量筒； （3）10mL 具塞刻度试管或 10 mL 容量瓶； （4）常用玻璃仪器； 2、 试剂： （1）乙醚：不含过氧化物。 （2）石油醚：沸程 30～60℃。 （3）盐酸（1+1）： （4）石油醚－乙醚（3+1）混合液： （5）氯化钠酸性溶液（40g /L）：于氯化钠溶液（40g /L）中加少量盐酸（1+1）酸化。 （6）无水硫酸钠（分析纯）。 （7）苯甲酸、山梨酸标准贮备液： 精密称取苯甲酸、山梨酸各 0.2000g，置于 100mL 容量瓶中，用石油醚－乙醚（3+1） 混合溶剂溶解后并定容至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于 2mg 苯甲酸或山梨酸。 （8）材料：饮料 四、测定步骤 1、 样品的提取： 吸取 10.00mL 均匀饮料（如样品中含有二氧化碳，先加热除去），放入 150mL 分液漏斗中， 加 1：1 盐酸 2mL，用 15、10mL 乙醚提取两次，每次振摇 1min，将上层醚提取液吸入另一 个 25mL 带塞量筒中，合并乙醚提取液。用 3mL 氯化钠酸性溶液（40g/L）洗涤两次，静止 15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入 25mL 容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确 吸取 5.0mL 乙醚提取液于 10mL 带塞离心管中，置 40℃的水浴上挥干,加入 2mL 石油醚-乙 醚(3+1)混合溶剂溶解残渣,密塞保存备用
2、色谱条件 (1)色谱柱：玻璃柱，内径3mm,长2m,内装涂以质量分数为5%DEGS+1%HPO4固定 液的60 30目chromosorbWAW (2)气体流速：载气为氮气，50 mI/min(氨气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择名 自的最佳比例条件)。 (3)灵敏度：1000 (4)温度：进样口（气化温度）230℃：柱温170℃：监测器230℃ 3、测定 (1)取6支10mL容量瓶，编号，并按下表操作记录。 编号 1 2 3 试剂 取苯甲酸或山梨酸标准0.25 075 100 125 溶液(mL) 相当于苯甲酸或山梨酸50 100 150 200 250 量(ug) 取样品乙醚提取液体积 (mL) 用石油醚定容(mL) 10 10 10 10 10 进样量(L) 2 2 2 2 2 测定峰高值 (2)以苯甲酸或山梨酸量(g)为横坐标，与其对应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。 (3)用样品测得峰高值与标准曲线比较定量， 五、结果计算 X= A×1000 m×3××100 25 式中 一样品中苯甲酸或山梨酸的含量。 g/kg: A 一测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的含量，g: V,一一样品提取液残留物定容的体积，L: V2一一进样体积，L: m一一样品质量.，g或mL: 525.-测定时吸取乙酰提取液的体积(mL)样品乙醚提取液的总体积(mL) 六、注意事项 1、由测得的苯甲酸的量乘以1.18，即为样品中苯甲酸钠的含量。 2、样品处理时酸化可使山梨酸钾、苯甲酸钠转变为山梨酸、苯甲酸。 3、乙醚提取液应用无水硫酸钠充分脱水，进样溶液中含水会影响测定结果 4、气相色谱仪的操作按仪器操作说明进 注意：点火前严禁打开氨气调节阀，以避免氢气逸出引起爆炸：点火后，不允许再转动放大 调零旋钮
2、 色谱条件 （1）色谱柱：玻璃柱，内径 3mm，长 2m，内装涂以质量分数为 5％DEGS+1％H3PO4固定 液的 60～80 目 chromosorbWAW。 （2）气体流速：载气为氮气，50mL/min（氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各 自的最佳比例条件）。 （3）灵敏度：1000 （4）温度：进样口（气化温度）230℃；柱温 170℃；监测器 230℃。 3、测定 （1）取 6 支 10mL 容量瓶，编号，并按下表操作记录。 编号 试剂 1 2 3 4 5 6 取苯甲酸或山梨酸标准 溶液（mL） 0.25 0.5 0.75 1.00 1.25 相当于苯甲酸或山梨酸 量（µg） 50 100 150 200 250 取样品乙醚提取液体积 (mL) 2 用石油醚定容（mL） 10 10 10 10 10 10 进样量（µL） 2 2 2 2 2 2 测定峰高值 （2）以苯甲酸或山梨酸量（µg）为横坐标，与其对应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。 （3）用样品测得峰高值与标准曲线比较定量。 五、结果计算 X= 1000 25 5 m 1000 1 2 × × × × V V A 式中： X——样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； A——测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的含量，µg； V1――样品提取液残留物定容的体积，mL； V2――进样体积，µL； m――样品质量，g 或 mL； 5/25-测定时吸取乙醚提取液的体积(mL)/样品乙醚提取液的总体积(mL)。 六、注意事项 1、由测得的苯甲酸的量乘以 1.18，即为样品中苯甲酸钠的含量。 2、样品处理时酸化可使山梨酸钾、苯甲酸钠转变为山梨酸、苯甲酸。 3、 乙醚提取液应用无水硫酸钠充分脱水，进样溶液中含水会影响测定结果。 4、 气相色谱仪的操作按仪器操作说明进行。 注意：点火前严禁打开氮气调节阀，以避免氢气逸出引起爆炸；点火后，不允许再转动放大 调零旋钮
Ⅱ、薄层色谱法 一、目的与要求 1、学习薄层色谱法分离食品中苯甲酸、山梨酸的基本原理。 2、堂握薄层色谱法的基本操作技术。 二、实验原理 试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上 展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行半定量。 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)吹风知 (2)层析缸 (3)玻璃板：10cm×18cm: (4)微量注射器：10L、100L: (5)喷雾器。 2、试剂 (1)异丙醇。 (2)正丁醇。 (3)石油醚：沸程30~60℃。 (4)乙醚：不含过氧化物。 (5)氨水 (6)无水乙醇 (7)聚酰胺粉：200目。 (8)盐酸(1+1)：取100mL盐酸，缓慢顺入水中，并稀释至200mL。 (9)氯化钠酸性溶液(401L):于氯化钠溶液(401)中加入少量盐酸(1+1)酸化 (10)展开剂如下 ①正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2) ②异丙醇+氨水+无水乙醇(7+1+2) (11)山梨酸标准溶液：准确称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶 中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸。 (12)苯甲酸标准溶液：准确称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶 中，并稀释至刻度 溶液每毫升相当于2.0mg苯甲酸 (13)显色剂：称取溴甲酚紫0.04g以(50%)乙醇溶解并稀释至100mL,用氢氧化钠溶液 (4g/L)调至DH=8。 四、烈定步骤 样品提取：同色谱法“四、1” (1)满层板的制备：称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3min 5min,立刻倒入涂布器内制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块，室温干燥后，于
Ⅱ、薄层色谱法 一、目的与要求 1、学习薄层色谱法分离食品中苯甲酸、山梨酸的基本原理。 2、掌握薄层色谱法的基本操作技术。 二、实验原理 试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上， 展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行半定量。 三、仪器与试剂 1、 仪器 （1）吹风机； （2）层析缸； （3）玻璃板：10cm×18cm； （4）微量注射器：10µL、100µL； （5）喷雾器。 2、试剂 （1）异丙醇。 （2）正丁醇。 （3）石油醚：沸程 30～60℃。 （4）乙醚：不含过氧化物。 （5）氨水。 （6）无水乙醇。 （7）聚酰胺粉：200 目。 （8）盐酸（1+1）：取 100mL 盐酸，缓慢倾入水中，并稀释至 200mL。 （9）氯化钠酸性溶液（40g/L）：于氯化钠溶液（40g/L）中加入少量盐酸（1+1）酸化。 （10）展开剂如下： ①正丁醇+氨水+无水乙醇（7+1+2） ②异丙醇+氨水+无水乙醇（7+1+2） （11）山梨酸标准溶液：准确称取 0.2000g 山梨酸，用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶 中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 2.0mg 山梨酸。 （12）苯甲酸标准溶液：准确称取 0.2000g 苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入 100mL 容量瓶 中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于 2.0mg 苯甲酸。 （13）显色剂： 称取溴甲酚紫 0.04g 以(50%)乙醇溶解并稀释至 100mL,用氢氧化钠溶液 （4g/L）调至 pH＝8。 四、测定步骤 1、 样品提取：同色谱法“四、1” 2、样品测定 (1)薄层板的制备： 称取 1.6g 聚酰胺粉，加 0.4g 可溶性淀粉，加约 15mL 水，研磨 3min～ 5min，立刻倒入涂布器内制成 10cm×18cm、厚度 0.3mm 的薄层板两块，室温干燥后，于
80℃干燥1h.取出，置于千燥器中保存， (2)点样：在海层板下端2cm的基线上，用微量注射器点10uL,20uL试样液，同时各点10uL 20uL山梨酸 苯甲酸标 (3)展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(10.①或10.②)的展开槽内，周 围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。 试样中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量（山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82、 0.73)。 五、结果计算 试样中苯甲酸或山梨酸的含量按下式进行计算。 A×1000 X=- 10××1000 25V 式中： X一试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为克每千克(gkg): A一测定用试样液中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克(mg): 加入乙醇的体积，单位为亮升(mL): Vz- -测定时点样的体积，单位为毫升(mL), m一试样质量，单位为克(g): 10一测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为毫升(mL): 25 一试样乙醚提取液总体积，单位为毫升(mL): 六、注意事项 1、层析用的溶剂系统不可存放太久，否则浓度和极性都会变化，影响分离效果，应新鲜配 用制。 2、在展开之前，展开剂在缸中应预先平衡1h,使缸内蒸气压饱和，以免出现边缘效应。 3、展开剂液层高度不能超过原线高度，约在0.5~1cm,展开至上端，待溶剂前沿上展至 1Ocm时，取出挥干 4、在点样时最好用吹风机边点边吹干，在原线上点，直至点完一定量。且点样点直径不超 过2mm. 思考题 样品处理时，酸化的目的是什么？ 2.气相色谱法定性的依据是什么？用已知物对照法定性时应注意什么？ 3.气相色谱法测定中用外标法定量有何优缺点？ 4.你对薄层色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸的实验有什么体会？ 5.比较两种方法各有什么优缺点？
80℃干燥 1h，取出，置于干燥器中保存。 (2)点样：在薄层板下端 2cm 的基线上，用微量注射器点 10µL，20µL 试样液，同时各点 10µL、 20µL 山梨酸、苯甲酸标准溶液。 (3)展开与显色： 将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂（10.①或 10.②）的展开槽内，周 围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至 10cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。 试样中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量（山梨酸、苯甲酸的比移值依次为 0.82、 0.73）。 五、结果计算 试样中苯甲酸或山梨酸的含量按下式进行计算。 X＝ 1000 25 10 m 1000 1 2 × × × × V V A 式中： X——试样中苯甲酸或山梨酸的含量，单位为克每千克（g/kg）； A——测定用试样液中苯甲酸或山梨酸的质量，单位为毫克（mg）； V1——加入乙醇的体积，单位为毫升（mL）； V2——测定时点样的体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）； 10——测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为毫升（mL）； 25——试样乙醚提取液总体积，单位为毫升（mL）； 六、注意事项 1、 层析用的溶剂系统不可存放太久，否则浓度和极性都会变化，影响分离效果，应新鲜配 制。 2、 在展开之前，展开剂在缸中应预先平衡 1h，使缸内蒸气压饱和，以免出现边缘效应。 3、 展开剂液层高度不能超过原线高度，约在 0.5～1cm，展开至上端，待溶剂前沿上展至 10cm 时，取出挥干。 4、 在点样时最好用吹风机边点边吹干，在原线上点，直至点完一定量。且点样点直径不超 过 2mm。 思考题： 1. 样品处理时，酸化的目的是什么？ 2. 气相色谱法定性的依据是什么?用已知物对照法定性时应注意什么? 3. 气相色谱法测定中用外标法定量有何优缺点？ 4. 你对薄层色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸的实验有什么体会？ 5. 比较两种方法各有什么优缺点?
实验二糖精含量的检测（薄层色谱法） 一、目的与要求 1,学习薄层色谱法测定食品中糖精含量的基本原理 2.掌握薄层色谱法的基本操作技术。 二、原理 在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取，浓缩、薄层色谱分离、显色后，与标准比 较，进行定性和半定量测定。 三、仪器与试剂 1.试剂 (1)盐酸溶液(1：1)为 (2)乙醚（不含过氧化物）： (3)无水硫酸钠：经550℃灼烧4h处理： (4)无水乙醇： (5)展开剂：苯：乙酸乙酯：醋酸=12：7：1： (6)糖精钠标准溶液：称取糖精钠0.1000g,用无水乙醇溶解并定容至100mL。此液含 标准精精钠为1mgmL。 (7)硅酸GF254: (8)羧甲基纤维素纳溶液(0.5%) 2.仪器 (1)玻璃板10×10cm (2)薄层层析装置：（见图4-1） (3)微量吸管及吹风筒： (4)紫外检测仪：波长254nm。 四、测定步骤 1.样品的提取 图41薄层层析装置 (1)饮料、冰棍、汽水： 1一层析缸：2一展开剂气：3一层板： 取10.0mL均匀试样（如试样中含有二氧化碳，先 4一盛液（悠展开剂：一隔 加热除去。如试样中含有酒精，加4%氢氧化钠溶液使其量碱性，在沸水浴中加热除去)， 置于100mL分液漏斗中，加2mL盐酸(1+1)，用30、20、20mL乙醚提取三次，合并乙 提取液，用5mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发 乙醚，加2.0mL乙醇溶解残留物，密塞保存，备用， (2)酱油、果汁、果酱等： 称取20.0g或吸取20.0mL均均试样，置于100mL容量瓶中，加水至约60mL,加20mL
实验二 糖精含量的检测(薄层色谱法) 一、目的与要求 1. 学习薄层色谱法测定食品中糖精含量的基本原理。 2. 掌握薄层色谱法的基本操作技术。 二、原理 在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取，浓缩、薄层色谱分离、显色后，与标准比 较，进行定性和半定量测定。 三、仪器与试剂 1. 试剂 （1）盐酸溶液（1:1）； （2）乙醚（不含过氧化物）； （3）无水硫酸钠：经 550℃灼烧 4h 处理； （4）无水乙醇； （5）展开剂：苯：乙酸乙酯：醋酸=12：7：1； （6）糖精钠标准溶液：称取糖精钠 0.1000g，用无水乙醇溶解并定容至 100mL。此液含 标准精精钠为 1mg/mL。 （7）硅酸 GF254； （8）羧甲基纤维素钠溶液（0.5%）。 2. 仪器 （1）玻璃板 10×10cm； （2）薄层层析装置；（见图 4-1） （3）微量吸管及吹风筒； （4）紫外检测仪：波长 254nm。 四、测定步骤 1. 样品的提取 （1）饮料、冰棍、汽水： 取 10.0mL 均匀试样（如试样中含有二氧化碳，先 加热除去。如试样中含有酒精，加 4%氢氧化钠溶液使其量碱性，在沸水浴中加热除去）， 置于 100mL 分液漏斗中，加 2mL 盐酸（1+1），用 30、20、20mL 乙醚提取三次，合并乙醚 提取液，用 5mL 盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发 乙醚，加 2.0mL 乙醇溶解残留物，密塞保存，备用。 （2）酱油、果汁、果酱等： 称取 20.0g 或吸取 20.0mL 均均试样，置于 100mL 容量瓶中，加水至约 60mL，加 20mL 图 4-1 薄层层析装置 1—层析缸；2—展开剂蒸气；3—薄层板； 4—盛液皿（盛展开剂）；5—隔板