荧光分子第二抗体抗体抗原AB（应用：包括直接荧光标记技术（将荧光素标记在相应的抗体（第一抗体）上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、易于操作，省时省力，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；特异性不强；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。）和间接免疫荧光标记技术（染色程序分为两步，第一步，用已知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原（待检标本）标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体（通常为荧光标记的对应二抗）。（即荧光素先和第二抗体偶联，再与第一抗体作用：优点是：敏感度高，特异性强，可购买不同的标记二抗：缺点是：操作比直接法复杂）如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的荧光标记的二抗就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定被检测抗原。）补充：纯化抗原A，免疫动物，从动物的抗血清里分离出抗体，抗原A的抗体称为一抗，一抗作为抗原，再去免疫动物（例如兔子），将兔子的抗血清分离，得到的是一抗的二抗；将二抗带上一个marker（可以是荧光素或可以用GFP与二抗做成融合蛋白），让二抗去找一抗结合，二抗带标记就可以观察。2、免疫电镜技术免疫电镜技术使特异蛋白的定位与超微结构结合起来，使抗原定位更准确。如蛋白分泌的研究胞内酶的研究；一些结构蛋白的研究。免疫铁蛋白技术：铁蛋白是含铁离子的蛋白质，在电镜下铁离子可显黑色；免疫酶标技术：辣根过氧化物酶（HRP）免疫胶体金技术：即金的水溶液，具有一般溶液的特性，用它与抗体标记后，经抗原抗体反应可定位抗原的存在。应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态：胞内酶的研究：膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等
（应用：包括直接荧光标记技术（将荧光素标记在相应的抗体（第一抗体）上，直接与相 应抗原反应。其优点是方法简便、易于操作，省时省力，非特异性荧光染色少。缺点是敏 感性偏低；特异性不强；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细 菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。）和间接免疫荧光 标记技术（染色程序分为两步，第一步，用已知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原 （待检标本）标本上，在湿盒中 37℃保温 30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除 去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗 IgG、IgM 抗体（通常为 荧光标记的对应二抗）。（即荧光素先和第二抗体偶联，再与第一抗体作用；优点是：敏 感度高，特异性强，可购买不同的标记二抗；缺点是：操作比直接法复杂） 如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的荧光标记的二抗就会和已结合抗原的抗体进一 步结合，从而可鉴定被检测抗原。 ） 补充：纯化抗原 A，免疫动物，从动物的抗血清里分离出抗体，抗原 A 的抗体称为一抗， 一抗作为抗原，再去免疫动物（例如兔子），将兔子的抗血清分离，得到的是一抗的二 抗；将二抗带上一个 marker（可以是荧光素或可以用 GFP 与二抗做成融合蛋白），让二 抗去找一抗结合，二抗带标记就可以观察。 2、免疫电镜技术 免疫电镜技术使特异蛋白的定位与超微结构结合起来，使抗原定位更准确。如蛋 白分泌的研究胞内酶的研究；一些结构蛋白的研究。 免疫铁蛋白技术：铁蛋白是含铁离子的蛋白质，在电镜下铁离子可显黑色； 免疫酶标技术：辣根过氧化物酶（HRP） 免疫胶体金技术 : 即金的水溶液，具有一般溶液的特性，用它与抗体标记后，经抗原抗 体反应可定位抗原的存在。 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的 定位与骨架蛋白的定位等
免疫铁蛋白电镜技术（铁蛋白分子量大，应用在膜上）细胞外表面胞质腔面张白A抗体胶体金抗原08P免疫胶体金电镜原位杂交技术的基本原理与应用（膀胱上皮细胞膜蛋白的分布：箭头所指)免疫胶体金电镜技术（胶体金分子量非常小，可穿透细胞膜，应用在溶酶体等）（金对电子的散射程度高，透射程度低，透射的越少，在荧光屏上看到的是一个亮点，这个亮点是个副片，起成正片的时候是一个黑点，就是金颗粒所在位置，即抗体所在位置，表示它找到了抗原结合）（用途：能观察抗原在细胞里的定位；细胞特殊蛋白质的定位）（过去用的是铁蛋白做标记，分辨率不如胶体金，因此胶体金技术代替了铁蛋白标记）
免疫铁蛋白电镜技术（铁蛋白分子量大，应用在膜上） 免疫胶体金电镜原位杂交技术的基本原理与应用（膀胱上皮细胞膜蛋白的分布：箭头所 指） 免疫胶体金电镜技术（胶体金分子量非常小，可穿透细胞膜，应用在溶酶体等）(金对 电子的散射程度高，透射程度低，透射的越少，在荧光屏上看到的是一个亮点，这个亮点 是个副片，起成正片的时候是一个黑点，就是金颗粒所在位置，即抗体所在位置，表示它 找到了抗原结合 )（用途：能观察抗原在细胞里的定位；细胞特殊蛋白质的定位）（过去 用的是铁蛋白做标记，分辨率不如胶体金，因此胶体金技术代替了铁蛋白标记）