(1)盐析 ●向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[(NH4)2S04,Na2S04,NaCl], 使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀,这种现象称为盐析。 ●盐析作用是由于当盐浓度较高时,盐离子与水分子作用,使水 的活度降低,原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水化 水,从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用,破坏蛋白 质分子表面的水化层。 Salting-out linle salting-in effect Ammonium 溶解度 sulfate Sodium sulfate Aggregate lonic strength
（1）盐析 ⚫ 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[（NH4)2SO4，Na2SO4，NaCl]， 使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀，这种现象称为盐析。 ⚫ 盐析作用是由于当盐浓度较高时，盐离子与水分子作用，使水 的活度降低，原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水化 水，从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用，破坏蛋白 质分子表面的水化层
分段盐析 ●不同的蛋白质分子,由于其分子表面的极 性基团的种类、数目以及排布的不同,其水 化层厚度不同,故盐析所需要的盐浓度也不 样,因此调节蛋白质中盐的浓度,可以使 不同的蛋白质分别沉淀。如: (NH4)2S04 血清 球蛋白 清蛋白 50%饱和度 饱和 析出 析出
⚫ 不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极 性基团的种类、数目以及排布的不同，其水 化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度也不 一样，因此调节蛋白质中盐的浓度，可以使 不同的蛋白质分别沉淀。如： 血清 球蛋白 清蛋白 (NH4)2SO4 50%饱和度 饱和 析出 析出 分段盐析
(2)等电点沉淀 蛋白质是两性电解质,其溶解度与其净电荷数 量有关,随溶液pH变化而变化。在溶液pH值 等于蛋白质等电点时,蛋白质的溶解度最小 ■不同的蛋白质有不同的等电点,因此通过调节 溶液pH到目的蛋白的等电点,可使之沉淀而 与其它蛋白质分开,从而除去大量杂蛋白
（2）等电点沉淀 ◼ 蛋白质是两性电解质，其溶解度与其净电荷数 量有关，随溶液pH变化而变化。在溶液pH值 等于蛋白质等电点时，蛋白质的溶解度最小。 ◼ 不同的蛋白质有不同的等电点，因此通过调节 溶液pH到目的蛋白的等电点，可使之沉淀而 与其它蛋白质分开，从而除去大量杂蛋白
(3)有机溶剂法 ■与水互溶的极性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮 等能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。 ■有机溶剂引起蛋白质变性的原因有两个 令降低水的介电常数,使蛋白质分子表面可解离 基团的离子化程度减弱,水化程度降低,促进 了蛋白质分子的聚集沉淀。 是极性有机溶剂与蛋白质争夺水化水,而使蛋 白质分子沉淀
（3）有机溶剂法 ◼ 与水互溶的极性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮 等能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。 ◼ 有机溶剂引起蛋白质变性的原因有两个： ❖ 降低水的介电常数，使蛋白质分子表面可解离 基团的离子化程度减弱，水化程度降低，促进 了蛋白质分子的聚集沉淀。 ❖ 是极性有机溶剂与蛋白质争夺水化水，而使蛋 白质分子沉淀
■室温下,这些有机溶剂不仅能使蛋白质沉淀, 而且伴随着变性。若预先将有机溶剂冷却,然 后在不断搅拌下将其逐渐加入蛋白质溶液中, 防止有机溶剂局部浓度过高,则在很大程度上 解决变性问题。 不同的蛋白质由于水化层厚度不同,发生沉淀 需要的有机溶剂浓度不同,因此可利用不同浓 度的有机溶剂分离不同的蛋白质
◼ 室温下，这些有机溶剂不仅能使蛋白质沉淀， 而且伴随着变性。若预先将有机溶剂冷却，然 后在不断搅拌下将其逐渐加入蛋白质溶液中， 防止有机溶剂局部浓度过高，则在很大程度上 解决变性问题。 ▪ 不同的蛋白质由于水化层厚度不同，发生沉淀 需要的有机溶剂浓度不同，因此可利用不同浓 度的有机溶剂分离不同的蛋白质