2.核酸的粗提纯 从细胞中提取得到的核酸,常混杂有蛋白质及各种 大小的核酸同类物等杂质,可采用适当方法进行粗 提纯。 粗提纯中,进一步将蛋白质除去可用去污剂或有机 溶剂多次反复提取。 从RNA除去混杂的DNA,可用 DNAase将DNA降 解掉。 从DNA中除去混杂的RNA,可用 RNAase将RNA降 解掉
2. 核酸的粗提纯 ◼ 从细胞中提取得到的核酸，常混杂有蛋白质及各种 大小的核酸同类物等杂质，可采用适当方法进行粗 提纯。 ◼ 粗提纯中，进一步将蛋白质除去,可用去污剂或有机 溶剂多次反复提取。 ◼ 从RNA除去混杂的DNA，可用DNAase将DNA降 解掉。 ◼ 从DNA中除去混杂的RNA，可用RNAase将RNA降 解掉
、精提纯 蛋白质精提纯 一般蛋白质样品经粗制分级后,体积较小,杂质 大部分被除去。进一步提纯,通常使用高分辨率的 柱层析及电泳方法。 ∮常用的柱层析方法有凝胶过滤、离子交换层析、 吸附层析、亲和层析。 常用的电泳方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚 焦电泳。 另外,结晶也是蛋白质分离纯化的方法之一,制 备的结晶物常常作为蛋白质结构分析之用
二、精提纯 1. 蛋白质精提纯 一般蛋白质样品经粗制分级后，体积较小，杂质 大部分被除去。进一步提纯，通常使用高分辨率的 柱层析及电泳方法。 常用的柱层析方法有凝胶过滤、离子交换层析、 吸附层析、亲和层析。 常用的电泳方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚 焦电泳。 另外，结晶也是蛋白质分离纯化的方法之一，制 备的结晶物常常作为蛋白质结构分析之用
2.核酸精提纯 核酸样品进行精提纯,一般常用超离心、电泳、 柱层析等方法。 超离心包括速度区带离心、沉降平衡超离心 电泳包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖电泳。 储者凝胶孔径小,适合分离1000个核苷酸以下的核 酸分子。后者孔径大,适合分离较大的核酸分子。 柱层析主要有凝胶过滤柱层析、离子交换层析、 羟基磷灰石柱层析
◼ 核酸样品进行精提纯，一般常用超离心、电泳、 柱层析等方法。 ◼ 超离心包括速度区带离心、沉降平衡超离心。 ◼ 电泳包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖电泳。 前者凝胶孔径小，适合分离1000个核苷酸以下的核 酸分子。后者孔径大，适合分离较大的核酸分子。 ◼ 柱层析主要有凝胶过滤柱层析、离子交换层析、 羟基磷灰石柱层析。 2. 核酸精提纯
三、纯度鉴定 生物大分子经过分离提纯,最后还要鉴定制品 的纯度。 蛋白质和酶制品纯度鉴定通常采用的方法有 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、等电聚焦电泳 法、超速离心沉降分析法等。 令选用任何单独一种鉴定方法都不能最后确定蛋 白质的纯度,必须同时采用2-3种不同的方法 才能确定
三、 纯度鉴定 ◼ 生物大分子经过分离提纯，最后还要鉴定制品 的纯度。 ◼ 蛋白质和酶制品纯度鉴定通常采用的方法有： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、等电聚焦电泳 法、超速离心沉降分析法等。 ❖ 选用任何单独一种鉴定方法都不能最后确定蛋 白质的纯度，必须同时采用2-3种不同的方法 才能确定
核酸的纯度鉴定一般采用琼脂糖凝胶和聚丙烯 酰胺凝胶电泳,沉降分析和紫外吸收法 (A260/A28)等方法。 令同蛋白质一样,核酸纯度鉴定也必须采用2-3 种方法才能确定。 bac
◼ 核酸的纯度鉴定一般采用琼脂糖凝胶和聚丙烯 酰胺凝胶电泳，沉降分析和紫外吸收法 （A260/A280）等方法。 ❖ 同蛋白质一样，核酸纯度鉴定也必须采用2-3 种方法才能确定