4.基因组文库的大小 一个文库要包含99%的基因组DNA时所需要 的克隆数目。 n(1-p) NE n(1-f) p:文库包含了整个基因组DNA的概率(99%) f:插入载体的DNA片断的平均长度占整个基因 组DNA的百分数 N:所需的重组载体数(克隆数)
4. 基因组文库的大小 一个文库要包含99%的基因组DNA时所需要 的克隆数目。 N= ln (1-p) ln (1-f) p: 文库包含了整个基因组DNA的概率（99%） f: 插入载体的DNA片断的平均长度占整个基因 组DNA的百分数 N：所需的重组载体数（克隆数）
in(1)n(1-99%) G n(1-f) n(1-f) 4.61× G N=4.61× G: Genome大小;f: fragment大小 例如:人的基因组是3×109bp,插入DNA片断 的平均长度如果是17×104bp G 3×109 N=4.61 f=461 7×104=8.1×10
例如：人的基因组是 3×109 bp，插入DNA片断 的平均长度如果是1.7×104 bp N= ln (1-p) ln (1-f) = ln (1-99%) ln (1-f) = 4.61× G f N= 4.61× G f G：Genome大小；f：fragment大小 N= 4.61× G f = 4.61× 3×109 1.7×104 = 8.1×105
、CDNA文库的构建 1. CDNA 以mRNA为模板逆转录出的DNA称cDNA。 3 mRNA 5引物cDNA反转录酶→ 3 2. CDNA library 利用某种生物的总mRNA合成cDNA,再将这些 CDNA与载体连接,转入细菌细胞中进行保存和扩 增,称cDNA文库
1. cDNA 以mRNA为模板逆转录出的DNA称cDNA。 2. cDNA library 二、 cDNA文库的构建 mRNA cDNA 3’ 3’ 5’ 5’ 引物 反转录酶 利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些 cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩 增，称cDNA文库
3.cDNA文库的特点 (1)不含内含子序列。 (2)可以在细菌中直接表达。 (3)包含了所有编码蛋白质的基因 (4)比DNA文库小的多,容易构建。 4.构建cDNA文库的一般步骤 (1)总RNA( total rna)提取 提取总RNA有商业化的试剂盒(kit
（1）不含内含子序列。 （2）可以在细菌中直接表达。 （3）包含了所有编码蛋白质的基因。 （4）比DNA文库小的多，容易构建。 4. 构建cDNA文库的一般步骤 （1）总RNA（total RNA）提取 3. cDNA文库的特点 提取总RNA有商业化的试剂盒（kit）
(2)mRNA的分离纯化 ①原理 利用mRNA都含有一段poyA尾巴,将 mRNA从总RNA(rRNA、tRNA等)中分离 纯化。 mRNA只占总RNA的1%-2% ②mRNA的分离纯化 Column(柱) 分离mRNA用商业化的 Oligo dT纤维柱
分离mRNA用商业化的Oligo dT纤维柱。 利 用 mRNA 都含有一段 polyA 尾 巴 ， 将 mRNA从总RNA（rRNA、tRNA等）中分离 纯化。 mRNA只占总RNA的1%-2%。 （2）mRNA的分离纯化 ① 原理 ② mRNA的分离纯化 Column（柱）