2.构建基因文库的载体选用 载体能够容载的DNA片断大小直接影响到构建完整 的基因文库所需要的重组子的数目。 (1)对载体的要求 载体容量越大,所要求的DNA片断数目越少, 所需的重组子越少。 (2)目前常用的载体 λ载体系列:容量为24kp cosmid载体:容量为50kb YAC 为1Mb BAC 容量为300kb
（2）目前常用的载体 2. 构建基因文库的载体选用 载体能够容载的DNA片断大小直接影响到构建完整 的基因文库所需要的重组子的数目。 载体容量越大，所要求的DNA片断数目越少， 所需的重组子越少。 （1）对载体的要求 载体系列： 容量为 24 kp cosmid载体： 容量为 50 kb YAC： 容量为 1 Mb BAC: 容量为 300 kb
3基因文库构建的一般步骤」 (1)染色体DNA大片段的制备 断点完全随机,片断长度合适于载体连接。不 虍用一般的限制性內切酶消化法。 ①物理切割法: 超声波(300bp)或机械搅拌(8kb) ②酶切法: 内切酶Sau3A进行局部消化。可得到10- 30kb的随机片断
断点完全随机，片断长度合适于载体连接。不 能用一般的限制性内切酶消化法。 （1）染色体DNA大片段的制备 3. 基因文库构建的一般步骤 超声波（300bp）或机械搅拌（8kb）。 ① 物理切割法： 内切酶Sau3A进行局部消化。可得到10- 30kb的随机片断。 ② 酶切法：
(2)载体与基因组DNA大片段的连接 直接连接、人工接头或同聚物加尾 ①粘性末端直接连接 载体与外源DNA大片段的两个未端都有 相同的粘性末端。 如:Sau3A与BamH的酶切末端。 ②人工接头法( adapter) 人工合成的限制性内切酶粘性末端片断
（2）载体与基因组DNA大片段的连接 ① 粘性末端直接连接 载体与外源DNA大片段的两个末端都有 相同的粘性末端。 如：Sau3A与BamH I的酶切末端。 直接连接、人工接头或同聚物加尾。 ②人工接头法（adapter） 人工合成的限制性内切酶粘性末端片断
各种酶的接头可以向公司定做或购买。 接上人工接头 粘性末端 ③同聚物加尾 末端转移酶 CCC CC 粘性末端
各种酶的接头可以向公司定做或购买。 接上人工接头 粘性末端 CCC 末端转移酶 CCC 粘性末端 ③ 同聚物加尾
Genomic dna Cleave with restriction endonucleases Insert into vectors Host cells take up DNA Culture and select individual colonies Host DNA 8( 寧)( ◎◎◎◎◎◎ Library of genomic clones