(3)连接酶连成完整双链 T4多核苷酸激酶使53OH磷酸化 T4DNA连接酶 完整的DNA双链
T4 DNA连接酶 T4多核苷酸激酶 使5’-OH磷酸化 完整的DNA双链 （3）连接酶连成完整双链
2.互补延伸连接法 预先设计的片断之间有局部互补区,可以相互作 为另一个片断延长的引物,用DNA聚合酶延伸成 完整的双链。 5 3 Klenow片段 引物 5 3 T4DNA连接酶 5 3
2. 互补延伸连接法 预先设计的片断之间有局部互补区，可以相互作 为另一个片断延长的引物，用DNA聚合酶延伸成 完整的双链。 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ T4DNA连接酶 Klenow片段 引物
、寡聚核苷酸化学合成的优点 1.直接合成基因 (1)mRNA的含量很低,很难作cDNA (2)有些基因比较短,化学合成费用较低 2.合成引物(20mer左右) 3.合成探针序列 4定点突变合成 合成带有定点突变的基因片断
1. 直接合成基因 三、 寡聚核苷酸化学合成的优点 2. 合成引物（20mer左右） （1）mRNA的含量很低，很难作cDNA 3. 合成探针序列 4. 定点突变合成 合成带有定点突变的基因片断。 （2）有些基因比较短，化学合成费用较低
5.合成人工接头或衔接物 含有各种酶切位点人工接头( Adaptor)或衔接 物( Linker)序列。 2,号 ECoRI Adaptor 55b ECoRI Linker DNA合成仪
DNA合成仪 5. 合成人工接头或衔接物 含有各种酶切位点人工接头（Adaptor）或衔接 物（Linker）序列。 EcoRI EcoRI Linker Adaptor
第三节目的基因的保存与文库构建 仁、基因文库的构建 1.基因文库( gene library) 将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小 合适的片断,并将所有这些片断都与适当的载体 连接,引入相应的宿主细胞中保存和扩增。 理论上讲,这些重组载体上带有了该生物体的 全部基因,称为基因文库
将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小 合适的片断，并将所有这些片断都与适当的载体 连接，引入相应的宿主细胞中保存和扩增。 理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的 全部基因，称为基因文库。 一、基因文库的构建 1. 基因文库（gene library） 第三节 目的基因的保存与文库构建