(2)合成过程 5 end e CH O KMeO)Tr H2 Hoc H2C5′0 80%乙酸 Jo-P= H2C HC 5 H OBZ enc OBZ 下亠个5端保护的单核苷酸又可以同3端保护的二核苷 酸聚合
（2）合成过程 下一个5’端保护的单核苷酸又可以同3’端保护的二核苷 酸聚合
2.磷酸三酯法 原理与磷酸二酯法一样。只是参加反应的单核 苷酸都是在3端磷酸和5-OH上都先连接了一个 保护基团。 A)DMT一二甲氧基三苯 DMT OCH, o 甲基 对氯苯0-P=0 氯
原理与磷酸二酯法一样。只是参加反应的单核 苷酸都是在3’端磷酸和5’-OH上都先连接了一个 保护基团。 2. 磷酸三酯法 DMT—二甲氧基三苯 甲基
合成的二核苷酸连接处有三个酯键! DMT JOCH,O、 固相磷酸三酯合成法 对氯苯O-P=0 将第一个核苷酸的3’-OH端 固定在固相支持物上 是目前通用的合成方法。 对氯苯O-P=0
将第一个核苷酸的3’-OH端 固定在固相支持物上。 固相磷酸三酯合成法 是目前通用的合成方法。 合成的二核苷酸连接处有三个酯键！
固相磷酸三酯合成过程 DMT DMT 对氯苯0-P=0 对氯苯O-P=0 氯苯o-P=0 A四唑催化 HO DMT JOCH 固相 固相 固相支持物支持物 支持物 结果是全保护的DNA:5'DMT,3固相支持物,核 苷酸之间对氯苯。最后脱保护
固相磷酸三酯合成过程 固相支持物 结果是全保护的DNA：5’ DMT, 3’固相支持物, 核 苷酸之间对氯苯。最后脱保护 固相 支持物 固相 支持物 C
仁、化学合成DNA片断的组装 化学合成的DNA片断一般在200bp以内。 1.互补连接法 (1)互补配对 预先设计合成的片断之间都有互补区域,不 同片断之间的互补区域能形成有断点的完整 双链 (2)5端磷酸化 用T4多核苷酸激酶使各个片段的5'端带上磷酸。 (合成的DNA单链的5端是OH)
化学合成的DNA片断一般在200bp以内。 二、 化学合成DNA片断的组装 用T4多核苷酸激酶使各个片段的5’端带上磷酸。 1. 互补连接法 预先设计合成的片断之间都有互补区域，不 同片断之间的互补区域能形成有断点的完整 双链。 （2）5’端磷酸化 （1）互补配对 （合成的DNA单链的5’端是-OH）