《医学生物学研究技术与实验》 实验课程部分 复旦大学上海医学院医学实验教学中心
实验一DNA重组与细胞转化 、实验目的 1.cacl2法制备感受态细胞(E. coli HB1101) 2.目的基因与载体的连接 (c-myc+pBR322;粘端连接) 3.重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体 (HB101; Ampr)
二、基因工程技术的基本内容 质粒载体(pBR322)的构建 目的基因(c-myc基因片段)的获取 载体与目的基因的连接(粘端连接) 重组体导入受体细胞(CaCl2法制备感受态细胞) 重组体的鉴定 目的基因在细胞中的表达 表达产物的分离、鉴定
Ecori Cla I Ecori Cla I 大肠杆菌HB101 pBR322 C-myc dna片段 CaCl,法 感受态细胞 1.4kb 转化 4.3kb 推板 TDNA连接酶 Amp平板 转化 ↓孵育过夜 4.3kb 5.7kb ④④题④题题
ECORI G AATT EcoRI 4359 ClaI. AT CGAT AmpR_promoter 4 粘性末端 防止载体的自身环化 目的基因定向插入 PVUII 2066 NdeI 2296 pGEX_3_primer pBR3质粒图谱