实验二重组DNA的 提取及酶切鉴定 复旦大学上海医学院 医学实验教学中心
一、实验目的 掌握以下方法和技术: 1.质粒DNA的小量快速制备 2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 3.DA的琼脂糖凝胶电泳
二、实验原理 1.质粒DNA的小量快速制备 分离质粒DNA有三个步骤: 1.培养细菌使质粒扩增 2.收集和裂解细菌(本实验:SDS裂解) 3分离和纯化质粒DNA(本实验:碱变性法)
碱变性法抽提质粒DNA Solution II Solution III 离心后去向 pH126 pH4.8 染色体DNA键断裂,双螺、不能复性 旋解开 沉淀中 氢键部分断裂, 质粒 DNA cccDNA互补链复性 上清中 不完全分离
2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 1,4kb EcoR I ECoR I+ClaI双酶切(酶切完全时) c-myc-pBR322 5.7kb 琼脂糖凝胶电泳凝胶中2条区带 43 kb pBr32质粒载体片段 4.3kb 14kbc-myc目的基因片段