目的基因(c-myc基因片段)的获取 c-myc基因是myc基因家族的重要成员之 c-myc基因与多种肿瘤发生发展有关 本实验采用的cmyc基因来源于人类组织细胞的14kb 的DNA片段 ECoR I和CaI双酶切处理
敢体与目的基因的连接构建量组子 1.平端连接 增加DNA浓度或提高连接酶浓度以提高连接效率 2.粘端连接 效率较高,加入连接酶后可立即转化,即有转化子 出现 3粘-平连接 画④题④题题题
连接酶的选择: T4DNA连接酶(适用粘端、平端连接) 大肠杆菌DNA连接酶(只适用粘端连接) 连接温度: 般12~16℃ 载体与目的基因的比例: 摩尔比约1:1~1:5
转化:将异源DNA分子引入另一细胞,使受体 细胞获得新的遗传性状。 感受态细胞:受体细胞经特殊方法(如电击 CaCl2等处理,细胞膜的通透性发生改变,允许 带外源DNA的载体分子进入的状态,称之。 转化体的筛选:选择性培养基 如:Amp抗性平板
实验器材与试剂 (详见实验讲义)