操作步骤 3.冰浴中在一微量离心管中依次加入下列试剂并 混匀 10× Klenow缓冲液 2.5μ ●10×dNTP 2.5ul Klenow片段 1.0ul [a-32PIdCTP 50u 4.将上述混合液加入到变性模板DNA随机引物 溶液中。 ●5.室温放置3小时以上
3. 冰浴中在一微量离心管中依次加入下列试剂并 混匀： l 10× Klenow 缓冲液 2.5μl l 10× dNTP 2.5μl l Klenow 片段 1.0μl l [α- 32P]dCTP 5.0μl l 4. 将上述混合液加入到变性模板DNA随机引物 溶液中。 l 5．室温放置3小时以上
操作步骤 ●6.加110.5 MOl/L EDta(pH8.0)终止 反应,并用TE缓冲液稀释反应液至 100μ,-20℃保存备用
l 6．加1μl 0 .5mol/L EDTA（pH8.0)终止 反 应 ， 并 用 T E 缓 冲 液 稀 释 反 应 液 至 100μl，—20℃保存备用
(四)光化生物素法 原理] ●光化生物素是一种化学合成的生物素衍 生物,分子中含有可光照活化的叠氮代 硝苯基,生成活泼N基团,后者易与 DNA或RNA中的伯胺基发生结合反应 生成光化生物素标记核酸探针
l ［原理］ l 光化生物素是一种化学合成的生物素衍 生物，分子中含有可光照活化的叠氮代 硝苯基，生成活泼N基团，后者易与 DNA或RNA中的伯胺基发生结合反应， 生成光化生物素标记核酸探针
●材料 ●1.光化生物素:在暗室中用灭菌双蒸水 配成1mg/m,分装后,避光下—20°c可 稳定保存4~6个月。 ●2.正丁醇或仲丁醇 ●3.特种光源:LYQ12-100卤钨灯
l 材料 l 1. 光化生物素：在暗室中用灭菌双蒸水 配成1mg/ml，分装后，避光下—20℃可 稳定保存4 ~ 6个月。 l 2. 正丁醇或仲丁醇 l 3. 特种光源： LYQ12-100卤钨灯
操作步骤 1.暗室安全灯下,在 Eppendorf管中加入1 25μg待标记核酸(0.5~1.0μg/ mI dna或 RNA),两倍量的光化生物素(即2~50g), 补水至50μl。将反应管敞开插入冰模中,距卤 钨灯光源10cm,强光照射30分钟。加100TE 缓冲液。此后操作在正常光线下。 2.加100ul正丁醇(或仲丁醇),抽提两次,去 上层正丁醇;
l 1. 暗室安全灯下，在Eppendorf管中加入1 ~ 25μg待标记核酸（0.5 ~ 1.0μg/ml DNA或 RNA），两倍量的光化生物素（即2 ~ 50μg）， 补水至50μl。将反应管敞开插入冰模中，距卤 钨灯光源10cm，强光照射30分钟。加100μl TE 缓冲液。此后操作在正常光线下。 l 2. 加100μl正丁醇（或仲丁醇），抽提两次，去 上层正丁醇；