操作步骤 ●3.加1/10体积3moL醋酸钠(pH5.2)和2 倍体积冷无水乙醇,混匀后置一20℃过 夜 4.离心的沉淀经干燥后,溶于适量的 0.1mol/ L EDTA或灭菌双蒸水中,浓度为 50ug/m,分装后—20°℃避光保存
l 3. 加1/10体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2 倍体积冷无水乙醇，混匀后置—20℃过 夜。 l 4. 离心的沉淀经干燥后，溶于适量的 0.1mol/L EDTA或灭菌双蒸水中，浓度为 50μg/ml，分装后—20℃避光保存
(五)DG标记探针 ●DIG标记是德国 Boehringer Mannheim公司发展 的一种非放射性标记方法。 Digoxigenin 11dUTP可以通过随机引物标记结合到DNA探 针或通过DNA体外转录标记到RNA探针,或通 过3′—尾端标记结合到寡聚核苷酸探针。然后 与抗地高辛抗体(anti- digonigenin alkaline phosphatase)进行免疫反应,通过化学呈色检 测。DlG标记法与前述同位素酶促标记法基本 相同
l DIG标记是德国Boehringer Mannheim公司发展 的一种非放射性标记方法。Di g o x i g e n i n - 11dUTP可以通过随机引物标记结合到DNA探 针或通过DNA体外转录标记到RNA探针，或通 过3′—尾端标记结合到寡聚核苷酸探针。然后 与抗地高辛抗体（anti—digonigenin alkaline phosphatase）进行免疫反应，通过化学呈色检 测。DIG标记法与前述同位素酶促标记法基本 相同
二.斑点杂交 原理] ●将DNA或RNA变性后直接点样吸附于固相支持 滤膜上,然后用标记探针与之杂交,洗涤去除 未反应探针,采用放射自显影或显色反应检测 示杂交信号,分析结果 ●本节主要介绍用a-32P标记DNA探针及光化生 物素标记DNA探针检测DNA与RNA的斑点杂 交方法
l ［原理］ l 将DNA或RNA变性后直接点样吸附于固相支持 滤膜上，然后用标记探针与之杂交，洗涤去除 未反应探针，采用放射自显影或显色反应检测 显示杂交信号，分析结果。 l 本节主要介绍用α- 32 P标记DNA探针及光化生 物素标记DNA探针检测DNA与RNA的斑点杂 交方法
材料 1器材 同位素探测仪 自动光密度扫描仪 真空抽滤加样器 Ⅹ光胶片盒(带增感屏)
1 器材 l 同位素探测仪 l 自动光密度扫描仪 l 真空抽滤加样器 l X光胶片盒（带增感屏）
2.试剂 ●(1)20×SSC(3mo/ L NaCl、O.3mo柠檬酸三 钠):称取17532 g Naci,加700m双蒸水, 充分溶解后,加882g柠檬酸三钠,溶解后加 双蒸水至1000ml,8磅高压灭菌15分钟。 ●(2)去离子甲酰胺:称取1lg离子交换树脂(Bio Bad Ac501-X8,20~25目)与110ml甲酰胺混 合,室温下搅拌30分钟,用 Waterman滤纸过滤 2次,分装后20℃保存
l ⑴20×SSC（3mol/L NaCl、0.3mol/L柠檬酸三 钠）：称取175.32g NaCl，加 700ml双蒸水， 充分溶解后，加88.2g 柠檬酸三钠，溶解后加 双蒸水至1000ml，8磅高压灭菌15分钟。 l ⑵去离子甲酰胺：称取11g离子交换树脂（Bio- Bad AG 501-X8，20~25目）与110ml甲酰胺混 合，室温下搅拌30分钟，用Waterman滤纸过滤 2次，分装后—20℃保存