石河子大学医学院 讲稿 课程名称 临床检验基础 任课班级 检验2009级本科(1) 任课教师 刘旻 教学职称 助教 检验系临床检验基础教研室 二O一一 一一二O一二学年第二学期
石河子大学医学院 讲稿 课程名称 临床检验基础 任课班级 检验 2009 级本科（1） 任课教师 刘旻 教学职称 助教 检验 系 临床检验基础 教研室 二○一一 ——二○一二学年第 二 学期
血液标本的采集、血涂片的制备 标本的采集和处理 1.血液标本的种类全血、血浆和血清。血细胞成分的检查：血清用于大部分临床生 化检查和免疫学检查：血浆也适用于部分临床生化检查，此外，凝血因子测定、游离血红蛋 白测定等必须采用血浆标本。 2.采血部位 (1)毛细血管采血：采血部位：指端、拇趾或足跟、烧伤者选择无炎症或水肿部位。 采血深度适当，切忌用力挤压。 (2)静脉采血：需血量较多时采用。 (3)动脉采血：用于血气分析时。股动脉或挠动采血。采得的血标本必须与空气隔 离，立即送检。 3.采血时间 (1)空腹采血：是指在禁食8小时后空腹采取的标本，一般是在晨起早餐前采血，常 用于临床生化检查。其优点是可避免饮食成分和白天生理活动对检验结果的影响，同时因每 次均在固定时间来血也便于对照比较。 (2)特定时间采血：激素、葡萄糖等的测定。检查微丝蚴需在半夜唤醒后来血。此外， 甘油三酯、维生素D等还可有季节性变化。进行治疗药物监测时，更需注意采血时药物浓度 的峰值和低谷。 (3)急诊采血：不受时间限制。检验单上应标明采血时间。 4.标本采集后的处理 (1)抗凝剂：采用全血或血浆标本时，充分混匀。常用的抗凝剂有：1)草酸盐：2)构檬 酸钠：3)肝素：4)EDTA (2)及时送检和检测 (3)微生物血标本 实验诊断的临床应用和评价 (一)正确选择实验室检查项目 实验分类：①按诊断价值分为：确定诊断项目、辅助诊断项目和鉴别诊断项目②按 报告方式分为：定性试验、定量试验和半定量试验实验 (二)参考值 1.参考值与正常值的差别 2.参考值的产生及意义 (三)检验质量的保证 1.分析前质控：选择检验项目、病人准备、正确地采集标本、及时送检、和正确地填写 检验申请单。 2.分析中质控：检验人员素质（上岗证）、实验室条件、检测方法和分析仪器、试剂， 室内或室间质量控制。 3.分析后质控：及时报告检验结果：医生综合分析，对检验结果的正确的解释。 (四)影响检验结果的常见因素 1. 操作因素 2. 个体差异人种、民族、性别、年龄、采血时间。 3 检验标本的采集和处理的影响。 4. 药物的影响
血液标本的采集、血涂片的制备 标本的采集和处理 1．血液标本的种类 全血、血浆和血清。血细胞成分的检查；血清用于大部分临床生 化检查和免疫学检查；血浆也适用于部分临床生化检查，此外，凝血因子测定、游离血红蛋 白测定等必须采用血浆标本。 2．采血部位 （l）毛细血管采血：采血部位：指端、拇趾或足跟、烧伤者选择无炎症或水肿部位。 采血深度适当，切忌用力挤压。 （2）静脉采血：需血量较多时采用。 （3）动脉采血：用于血气分析时。股动脉或挠动采血。采得的血标本必须与空气隔 离，立即送检。 3．采血时间 （1）空腹采血：是指在禁食 8 小时后空腹采取的标本，一般是在晨起早餐前采血，常 用于临床生化检查。其优点是可避免饮食成分和白天生理活动对检验结果的影响，同时因每 次均在固定时间来血也便于对照比较。 （2）特定时间采血：激素、葡萄糖等的测定。检查微丝蚴需在半夜唤醒后来血。此外， 甘油三酯、维生素 D 等还可有季节性变化。进行治疗药物监测时，更需注意采血时药物浓度 的峰值和低谷。 （3）急诊采血：不受时间限制。检验单上应标明采血时间。 4．标本采集后的处理 （l）抗凝剂：采用全血或血浆标本时，充分混匀。常用的抗凝剂有：1）草酸盐： 2）构檬 酸钠： 3）肝素： 4）EDTA （2）及时送检和检测 （3）微生物血标本 实验诊断的临床应用和评价 （－）正确选择实验室检查项目 实验分类：①按诊断价值分为：确定诊断项目、辅助诊断项目和鉴别诊断项目②按 报告方式分为：定性试验、定量试验和半定量试验实验 （二）参考值 １．参考值与正常值的差别 ２．参考值的产生及意义 （三）检验质量的保证 1．分析前质控：选择检验项目、病人准备、正确地采集标本、及时送检、和正确地填写 检验申请单。 2．分析中质控：检验人员素质（上岗证）、实验室条件、检测方法和分析仪器、试剂， 室内或室间质量控制。 3．分析后质控：及时报告检验结果；医生综合分析，对检验结果的正确的解释。 （四）影响检验结果的常见因素 1． 操作因素 2． 个体差异 人种、民族、性别、年龄、采血时间。 3． 检验标本的采集和处理的影响。 4． 药物的影响
(五)检验结果解释 1.检验结果诊断的局限性 2.结合临床资料综合分析的重要性 血涂片的制作及白细胞分类计数 染色原理 血涂片经Wright染色后进行分类计数。细胞受色包括物理吸附与化学亲和作用。酸性染料 伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合，使其染成红色：碱性染料美蓝与细 胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合，使其染成兰色。 介于两者之间的中性物质如白细胞染色质、中性粒细胞颗粒及血小板颗粒区染成紫色。由于 不同细胞的成分不同，对两种染料结合的多少也不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形 成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH一般在6.4-68， 偏陆性热料可与绥中液中游基記中和作用，偏移性边料叫与缓中液中的陆其起中和作用，使 pH恒定。 制备血涂片 推片：取外周血一滴与载玻片右端，左手持载玻片，右手持推玻片，从血滴前方向后移动 接触血滴，使其沿推片下缘散开。然后以平稳的速度将血液向前推进，注意推片与载玻片 之间保持约30度的平面夹角，血液在载玻片上形成一舌形，边缘整齐，厚薄适宜头体尾分 明的血膜。 干燥：手持载玻片末端，迅速挥动玻片，使之在空气中干燥。 标记：用记号笔在载玻片右上角标记被检者编号 染色 ①准备：血膜干透后，用特制蜡笔在血片两端划线，以防染色时染液外溢。加I液（瑞氏染 液)：在涂片上加数滴，以染液覆盖整个血膜为度。静置0.5-lmin。加Ⅱ液（缓冲液）：滴 加约两倍于I液的的量，用吸球吹气混匀，染色5-l0min,注意防止干涸。 ②染色效果观察：将血涂片小心移至显微镜物台上。用低倍镜观察体尾交界处血细胞平铺的 部分，如红细胞呈粉红色，各类白细胞核、胞质着色清晰，说明染色恰到好处，可进行冲洗。 ③冲洗不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。 ④干燥直立血涂片，使其自然干燥。 注意事项： 1.血膜厚薄要适宜 2.染色时切记染液干酒 3使用的染液量，染液、磷酸盐缓冲液比例，染色时间长短，要依具体情况而定 计数方法： 通过镜检进行分类 用低倍镜检视全片，选择细胞分布均匀着色良好体、尾交界处加香柏油，用油镜沿弓字 形轨道向尾部检视，分别计数各种白细胞，计数100个求得各类白细胞的出现率 注意事项 1.分类时要有秩序地、循一定方向顺序地连续进行，既不重复亦不遗漏，避免主观选择视 野。 2.白细胞总数在(3.0~15.0)×109L之间者，分类计数100个细胞。总数在15.0×109/1 以上时，应计数200个白细胞，而总数低于3.0×109L时，则应选用2张血涂片计数50 100个白细胞
（五）检验结果解释 1. 检验结果诊断的局限性 2. 结合临床资料综合分析的重要性 血涂片的制作及白细胞分类计数 染色原理 血涂片经 Wright 染色后进行分类计数。细胞受色包括物理吸附与化学亲和作用。酸性染料 伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合，使其染成红色；碱性染料美蓝与细 胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合，使其染成兰色。 介于两者之间的中性物质如白细胞染色质、中性粒细胞颗粒及血小板颗粒区染成紫色。由于 不同细胞的成分不同，对两种染料结合的多少也不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形 成的化合物重新离解。缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定,PBS 的 pH 一般在 6.4-6.8 ， 偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。 制备血涂片 推片：取外周血一滴与载玻片右端，左手持载玻片，右手持推玻片，从血滴前方向后移动， 接触血滴，使其沿推片下缘散开。 然后以平稳的速度将血液向前推进，注意推片与载玻片 之间保持约 30 度的平面夹角，血液在载玻片上形成一舌形，边缘整齐，厚薄适宜头体尾分 明的血膜。 干燥：手持载玻片末端，迅速挥动玻片，使之在空气中干燥。 标记：用记号笔在载玻片右上角标记被检者编号 染色 ①准备：血膜干透后，用特制蜡笔在血片两端划线，以防染色时染液外溢。加Ⅰ液（瑞氏染 液）：在涂片上加数滴，以染液覆盖整个血膜为度。静置 0.5-1min。加Ⅱ液（缓冲液）：滴 加约两倍于Ⅰ液的的量，用吸球吹气混匀，染色 5-10min，注意防止干涸。 ②染色效果观察：将血涂片小心移至显微镜物台上。用低倍镜观察体尾交界处血细胞平铺的 部分，如红细胞呈粉红色，各类白细胞核、胞质着色清晰，说明染色恰到好处，可进行冲洗。 ③冲洗 不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。 ④干燥 直立血涂片，使其自然干燥。 注意事项： 1.血膜厚薄要适宜 2.染色时切记染液干涸 3.使用的染液量，染液、磷酸盐缓冲液比例，染色时间长短，要依具体情况而定 计数方法： 通过镜检进行分类 用低倍镜检视全片，选择细胞分布均匀着色良好体、尾交界处加香柏油，用油镜沿弓字 形轨道向尾部检视，分别计数各种白细胞，计数 100 个求得各类白细胞的出现率 注意事项 1．分类时要有秩序地、循一定方向顺序地连续进行，既不重复亦不遗漏，避免主观选择视 野。 2．白细胞总数在（3.0～15.0）×109/L 之间者，分类计数 100 个细胞。总数在 15.0×109/L 以上时，应计数 200 个白细胞，而总数低于 3.0×109/L 时，则应选用 2 张血涂片计数 50～ 100 个白细胞
3.分类计数的同时，应注意白细胞、红细胞、血小板的形态改变以及有无血液寄生虫 循环血液中的白细胞包括： 1、中性粒细胞 2、嗜酸性粒细胞 3、嗜碱性粒细胞 4、淋巴细胞 5、单核细胞 参考值：白细胞数： 成人(4~10)×109/L 新生儿(15~20)×109/1 中性粒细啊 N 050-070 林巴细狗 L 0.200.40 单核细胞 0.03-0.08 嗜酸性粒细胞 E 0005005 塔威性粒细胞 B 00.01 临床意义 中性粒细胞 1.增高 生理性 ①胎儿、新生儿②妊娠后期③分娩和产伤④剧烈、运动、劳动⑤严寒、暴 热⑥淋浴、狗餐后 病理性 ①急性感染 ②严重组织损伤③急性大出血、溶血④急性中毒⑤白血病、 恶性种瘤 2减少（白细胞总数低干4X109/L称为白细胞减少） ①某些病毒、G杆菌感染②某些血液病③自身免疫性疾病(SLE)④某些理化损伤⑤ 脾功能亢进 嗜酸性粒细胞 1.增高①变态反应性疾病②寄生虫病③某些皮肤病④某些传染病（猩红热）⑤某些血 液病⑥某些恶性种瘤（何杰金、肺Ca) 2.减少①长期使用皮质素②急性传染病 转城性粒细阳 1增高①慢性粒细胞白血病②嗜碱性粒细胞白血病③转移瘤④骨髓纤维化症 2.减少无意义 淋巴细胞 1增高 生理性：小儿生后4-6天，4-6岁 病理性：①病毒感染②慢性感染③淋巴细胞白血病、淋巴瘤④急性传染病恢复期⑤组 织移植后的排斥反应 2.减少 病理性：①射线照射②肾上腺皮质激素③免疫缺陷 单核细胞 1.增高： 生理性：婴幼儿、儿童高于成人 病理性：①某些感染②血液病③急性传染病和急性感染恢复期 2.减小： 无意义 中性杆状核粒细胞：圆形，直径约10一15μm。胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒
3.分类计数的同时，应注意白细胞、红细胞、血小板的形态改变以及有无血液寄生虫 循环血液中的白细胞包括： 1、中性粒细胞 2、嗜酸性粒细胞 3、嗜碱性粒细胞 4、淋巴细胞 5、单核细胞 参考值：白细胞数： 成人（4～10）×109／L 新生儿(15～20)×109／L 中性粒细胞 N 0.50~0.70 淋巴细胞 L 0.20~0.40 单核细胞 M 0.03~0.08 嗜酸性粒细胞 E 0.005~0.05 嗜碱性粒细胞 B 0~0.01 临床意义 中性粒细胞 1.增高 生理性 ①胎儿、新生儿 ②妊娠后期 ③分娩和产伤 ④剧烈、运动、劳动 ⑤严寒、暴 热 ⑥淋浴、饱餐后 病理性 ①急性感染 ②严重组织损伤 ③急性大出血、溶血 ④急性中毒 ⑤白血病、 恶性肿瘤 2.减少（白细胞总数低于 4×109 ／L 称为白细胞减少 ） ①某些病毒、G-杆菌感染 ②某些血液病 ③自身免疫性疾病（SLE）④某些理化损伤 ⑤ 脾功能亢进 嗜酸性粒细胞 1.增高 ①变态反应性疾病 ②寄生虫病 ③某些皮肤病 ④某些传染病（猩 红热）⑤某些血 液病 ⑥某些恶性肿瘤（何杰金、肺 Ca） 2.减少 ①长期使用皮质素②急性传染病 嗜碱性粒细胞 1.增高 ① 慢性粒细胞白血病 ② 嗜碱性粒细胞白血病 ③ 转移瘤 ④ 骨髓纤维化症 2.减少 无意义 淋巴细胞 1. 增高 生理性：小儿生后 4-6 天，4-6 岁 病理性：①病毒感染 ②慢性感染 ③淋巴细胞白血病、淋巴瘤 ④急性传染病恢复期 ⑤组 织移植后的排斥反应 2.减少 病理性：①射线照射②肾上腺皮质激素③免疫缺陷 单核细胞 1.增高： 生理性：婴幼儿、儿童高于成人 病理性：①某些感染②血液病③急性传染病和急性感染恢复期 2.减小：无意义。 中性杆状核粒细胞：圆形，直径约 10—15μm。胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒
(染色不佳时则看不清楚)。核染成深紫色，其形状多样，可呈马蹄形，带形或S形。 中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细脂 中性分叶核粒细胞：圆形，直径约10一15μm,核呈分叶状，在叶之间有细丝相连的或完全 断开或互相重叠.浆内可见特异性颗粒.常分2.5叶，三叶以上多见。 嗜酸性白细胞：圆形，大小，形态与嗜中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的橙红色颗 粒，核多数为两叶。 嗜酸性粒细胞 嗜碱性白细胞：圆形，大小、形态与嗜中性白细胞相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色颗粒， 常遮盖在核上。核分叶不明显。 淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形或椭圆形，直径约7一10μm,核染成深紫色，圆 形或肾形。胞浆很少，常仅呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞常呈椭圆形，直径约 12一15μm,核圆形或肾形。胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时 内含少数紫红色大颗粒
(染色不佳时则看不清楚)。核染成深紫色，其形状多样，可呈马蹄形，带形或 S 形。 中性分叶核粒细胞：圆形，直径约 10—15μm，核呈分叶状，在叶之间有细丝相连的或完全 断开或互相重叠．浆内可见特异性颗粒．常分２-５叶，三叶以上多见。 嗜酸性白细胞：圆形，大小，形态与嗜中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的橙红色颗 粒，核多数为两叶。 嗜碱性白细胞：圆形，大小、形态与嗜中性白细胞相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色颗粒， 常遮盖在核上。核分叶不明显。 淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形或椭圆形，直径约 7—10μm，核染成深紫色，圆 形或肾形。胞浆很少，常仅呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞常呈椭圆形，直径约 12—15μm，核圆形或肾形。胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时 内含少数紫红色大颗粒