实验五免疫印迹试验免疫印迹法 - 检测ANA谱
实验五 免疫印迹试验 免疫印迹法 –检测ANA谱
一、实验目的及要求掌握：免疫印迹法检测ANA谱的原理及结果判定熟悉：免疫印迹法检测ANA谱的操作及注意事项了解：ANA谱检测的临床意义
掌握：免疫印迹法检测ANA谱的原理及结果判定 熟悉：免疫印迹法检测ANA谱的操作及注意事项 了解： ANA谱检测的临床意义 一、实验目的及要求
二、概念1.SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠--聚丙烯酰胺凝胶2.NC:硝酸纤维素3.ANA:是以真核细胞成分为靶抗原的自身抗体的总称。4.自身抗体:因自身免疫系统紊乱而产生的针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体
二、概念 1. SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶. 2. NC: 硝酸纤维素. 3. ANA:是以真核细胞成分为靶抗原的自身抗体 的总称。 4.自身抗体:因自身免疫系统紊乱而产生的针对自 身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体
5.免疫印迹技术(immunoblottingtechnique):是凝胶电泳与固相免疫相结合的一种复合免疫技术.是生物大分子物质核酸或蛋白质)通过不同的途径转移到固相载体上然后与相应的探针发生化学或免疫学反应,显示谱带用来分析DNA的称Southernblot，分析RNA的称为Northernblot，分析蛋白质的称Westernblot
5. 免疫印迹技术 (immunoblotting technique):是凝胶电泳与固相 免疫相结合的一种复合免疫技术.是生物大分子物质 (核酸或蛋白质)通过不同的途径转移到固相载体上, 然后与相应的探针发生化学或免疫学反应,显示谱带. 用来分析DNA的称Southern blot, 分析RNA的称为 Northern blot, 分析蛋白质的称Western blot
三、实验原理（动画演示）先将各种细胞核组分进行SDS－PAGE电泳，使各种抗原组分按分子量大小分离后转移至NC膜上。待测血清中的特异性IgG抗体与印迹膜上的抗原结合形成免疫复合物,加入酶标抗人IgG抗体作为示踪二抗，与复合物中的特异性IgG结合，形成膜条抗原－特异性IgG－酶标抗人IgG抗体复合,加入底物，使区带显色。根据膜上显色区带的位置，参比ANA标准带图谱即可判断有无某种ANA。ldiaoy002
三、实验原理 (动画演示) 先将各种细胞核组分进行SDS－PAGE电泳，使 各种抗原组分按分子量大小分离后转移至NC膜上。 待测血清中的特异性IgG抗体与印迹膜上的抗原结合 形成免疫复合物,加入酶标抗人IgG抗体作为示踪二抗， 与复合物中的特异性IgG结合，形成膜条抗原－特异 性IgG－酶标抗人IgG抗体复合,加入底物，使区带显 色。根据膜上显色区带的位置，参比ANA标准带图谱， 即可判断有无某种ANA