实验4平板菌落计数法和 显微镜直接计数法 主讲教师:王英明 复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心
实验4 平板菌落计数法和 显微镜直接计数法 复旦大学生物科学国家级实验教学示范中心 主讲教师：王英明
原理 9 o ①显微镜直接计数法 计微生」②平板菌落计数法 物数③滤膜菌落计数法十间接计数法/菌计数法 微生物 ④MPN法 数量测定 ①重量法(干重或湿重) 测微生②光吸收法(A60m) 物量 ③成分测量法(如核酸法、叶绿素A法等) ④生理指标法(如测定呼吸强度、耗氧量和酶活等)
原理 微生物 数量测定 测微生 物量 计微生 物数 ① 显微镜直接计数法 ② 平板菌落计数法 ③ 滤膜菌落计数法 ④ MPN法 间接计数法/活菌计数法 ① 重量法（干重或湿重） ② 光吸收法（A600nm） ③ 成分测量法（如核酸法、叶绿素A法等） ④ 生理指标法（如测定呼吸强度、耗氧量和酶活等）
月 原理 平板菌落计数法在无菌培养皿中加适量菌悬液(或其稀释液),再加入融化并冷 却至适当温度(一般约50°℃)的固体培养基,混合均匀,平放至彻底凝固,然后适温培 养,其中的单个细胞(或单个孢子)形成一个菌落(也可能几个临近细胞形成一个菌 落)。根据适当稀释度平板上的菌落数,计算单位体积原始样品中的活菌数,即能够形 成菌落的微生物数(单位CFU, Colony- Forming Units)。 本实验采用平板菌落计数法测定环境水样中细菌菌落总数。细菌菌落总数是判定水样 污染程度的标志之一,按照GB5749-2006,我国生活饮用水的活菌数小于100CFU/mL。 测定细菌总数时,一般采用十倍稀释法稀释样品
在无菌培养皿中加适量菌悬液（或其稀释液），再加入融化并冷 却至适当温度（一般约50 ℃）的固体培养基，混合均匀，平放至彻底凝固，然后适温培 养，其中的单个细胞（或单个孢子）形成一个菌落（也可能几个临近细胞形成一个菌 落）。根据适当稀释度平板上的菌落数，计算单位体积原始样品中的活菌数，即能够形 成菌落的微生物数（单位CFU，Colony-Forming Units）。 本实验采用平板菌落计数法测定环境水样中细菌菌落总数。细菌菌落总数是判定水样 污染程度的标志之一，按照GB5749-2006，我国生活饮用水的活菌数小于100 CFU/mL。 测定细菌总数时，一般采用十倍稀释法稀释样品。 原理 平板菌落计数法
月 材料和仪器 1.样品:地衣芽孢杆菌,0.25g制成2500mL菌悬液 2.培养基:牛肉膏蛋白胨固体培养基。 3.仪器:培养箱、灭菌锅和恒温水浴锅。 4.其他材料和器皿等:煤气灯、生理盐水、无菌样品瓶、培养皿、无菌试管、移液管、 手动移液器、样品瓶(玻璃塞)
1．样品：地衣芽孢杆菌，0.25 g制成2500 mL菌悬液。 2．培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基。 3．仪器：培养箱、灭菌锅和恒温水浴锅。 4．其他材料和器皿等：煤气灯、生理盐水、无菌样品瓶、培养皿、无菌试管、移液管、 手动移液器、样品瓶（玻璃塞）。 材料和仪器
月 流程 0.5mL0.5m0.5mL0.5mh 原液 10 10 10 10-4 无菌生理盐水 4.5mL1.0mL 0mL\1.0m\1.0m ×2 ×2 1 融化并冷却 至50℃培 37°C 养基15n2 计数 培养48h 10-3 10-4 空白对照
10-2 10-3 10-4 空白对照 4.5 mL 1.0 mL 融化并冷却 至50 ℃培 养基15 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL ×2 ×2 ×2 ×1 原液 10-1 10-2 10-3 10-4 ×2 ×2 ×2 ×1 无菌生理盐水 流程 计数 37 ℃ 培养48 h