实验六SSCP检测技术实验目的：1.了解SSCP基本原理；2.掌握SSCP技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法
实验六 SSCP检测技术 实验目的： 1.了解SSCP基本原理； 2.掌握SSCP技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法
实验原理1．单链构象多态性（Singlestrandconfirmatiorpolymorphism，SScP）检测技术是一种基于DNA构象差别来检测点突变的方法。DNA片段由双链变成单链后，在非变性的条件下会折叠成不同的空间构像，这种空间构像会因为个别核苷酸的置换而改变。长度相同或相近的单链在电泳时由于构像不同而具有不同的迁移率，从而显示多态性
实验原理 1. 单链构象多态性（Single strand confirmation polymorphism ，SSCP）检测技术是一种基于 DNA构象差别来检测点突变的方法。DNA片段 由双链变成单链后，在非变性的条件下会折叠 成不同的空间构像，这种空间构像会因为个别 核苷酸的置换而改变。长度相同或相近的单链 在电泳时由于构像不同而具有不同的迁移率， 从而显示多态性
CACBBCACABBBcCAA基因型
基因型 AB BB BC CC AC AA AC B
2．聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离小于1Kb的DNA片段，长度仅相差0.1%(即1000bp中的1bp)的核苷酸分子即能分离。3．银染原理：银离子与DNA结合后，再通过还原剂（甲醛）将银离子还原，从而发生显色反应，使核酸条带可见
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离小于1Kb的 DNA片段，长度仅相差0.1%(即1000 bp 中的1bp)的核苷酸分子即能分离。 3. 银染原理：银离子与DNA结合后，再通过 还原剂（甲醛）将银离子还原，从而发生 显色反应，使核酸条带可见
实验步骤1.PCR产物变性：（1）取PCR扩增产物8μL于一灭菌离心管中加入等体积的变性缓冲液中，封好离心管。（2）95℃水浴中变性5～10min后，立即冰浴5min以上，直至上样时取出。变性缓冲液：甲酰胺，EDTA，二甲苯青，溴酚蓝
实验步骤 1.PCR产物变性： （1）取PCR扩增产物8 µL于一灭菌离心管中， 加入等体积的变性缓冲液中，封好离心管。 （2）95℃水浴中变性5～10 min后，立即冰 浴5 min以上，直至上样时取出。 变性缓冲液： 甲酰胺，EDTA，二甲苯青，溴酚蓝