LaCZ基因的结构与产物 P Acla Lacβ 转录 翻译 pUC18→BmH片段 涂布在含X-Gal 重组DNA分子→转化Ecol和Ap的平板上 外源DNA→Ba团H片段 白色菌落为重组 子,兰色菌为 利用LacZ基因筛选重组子 原载体
P LacZα LacZβ 转录 翻译 α β LacZ基因的结构与产物 pUC18 BamHI片段 重组DNA分子 转化E.coli 外源DNA BamHI片段 涂布在含X-Gal 和Ap的平板上, 白色菌落为重组 子，兰色菌落为 原载体 利用LacZ基因筛选重组子
6)葡萄糖苷酸酶基因(GUS) 该基因编码一种可分解各种β-葡萄糖苷酸酶基因衍生物 的水解酶。该标记基因除具有上述laCZ基因的优点外, 它的适用范围十分广泛,因为许多生物中没有这种基因。 7)荧光素酶基因 荧光素酶或由萤火虫产生的可催化蜜蜂荧光素氧化的酶, 并产生荧光,若在反应中加入CoA,可使灵敏度提高10 倍;或由发光细菌( Photobacterium fischeri)产生的荧 光素酶,它与FMN-氧化还原酶联用,通过NAD(P)H的 变化测定酶活。 8)发光蛋自质基因 发光蛋白是由水母产生的一种可发光的蛋白质,该蛋白 质可使大肠杆菌菌落呈蓝色
6）葡萄糖苷酸酶基因（GUS） 该基因编码一种可分解各种β-葡萄糖苷酸酶基因衍生物 的水解酶。该标记基因除具有上述lacZ基因的优点外， 它的适用范围十分广泛，因为许多生物中没有这种基因。 7）荧光素酶基因 荧光素酶或由萤火虫产生的可催化蜜蜂荧光素氧化的酶， 并产生荧光，若在反应中加入CoA，可使灵敏度提高10 倍；或由发光细菌（Photobacterium fischeri）产生的荧 光素酶，它与FMN-氧化还原酶联用，通过NAD(P)H的 变化测定酶活。 8）发光蛋白质基因 发光蛋白是由水母产生的一种可发光的蛋白质，该蛋白 质可使大肠杆菌菌落呈蓝色
四、分子克隆载体的复制起点与种类 1.复制起点的种类 1)核内复制起点 a、染色体复制起点一原核生物(环状)和真核生物(线 状)染色体 b.染色体外复制起点 i.质粒— DNARNA,线状环状,单链,双链 原核与真核生物 i.病毒一同上,细胞内和病毒颗粒内 2)核外复制起点 a.线粒体一所有真核细胞 两种质体中亦可能含有质粒 b.叶绿体一所有绿色植物细胞
四、分子克隆载体的复制起点与种类 1. 复制起点的种类 1) 核内复制起点 a. 染色体复制起点—原核生物(环状)和真核生物(线 状)染色体 b. 染色体外复制起点 i. 质粒—DNA,RNA,线状,环状,单链,双链 原核与真核生物 ii. 病毒—同上, 细胞内和病毒颗粒内 2) 核外复制起点 a. 线粒体—所有真核细胞 两种质体中亦可能含有质粒 b. 叶绿体—所有绿色植物细胞
3.按复制起点划分克隆载体 1)质粒复制型一复制起点来自质粒或线粒体和叶绿体 2)△RS复制型一ARS( autonomus replicative sequence),或称染色体复制型 3)病毒复制型一复制起点来自病毒,若为RNA病毒, 必须反转录为cDNA。 4)混合复制型 a.同种生物复制起点混合一质粒形式存在;质粒或 病毒形式存在
3. 按复制起点划分克隆载体 1) 质粒复制型—复制起点来自质粒或线粒体和叶绿体 2) ARS复制型—ARS（autonomus replicative sequence)，或称染色体复制型 3) 病毒复制型—复制起点来自病毒，若为RNA病毒， 必须反转录为cDNA。 4) 混合复制型 a. 同种生物复制起点混合—质粒形式存在；质粒或 病毒形式存在
例:大肠杆菌(E.col)的噬粒( phagemid)载体既含有 来自质粒的复制起点,又含有来自噬菌体(如M13) 的复制起点。在不同条件下,它可以质粒或噬菌体 的复制起点进行复制,从而获得质粒ds-DNA或噬菌 体ss-DNA 又如:酿酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)的某些载体 既含有质粒(2μ)复制起点,又含有ARS片段 b.不同生物复制起点混合一穿梭载体( shuttle vector) 两种生物中均以质粒形式存在;在一种生物中以质粒形式 存在,在另一种生物中以质粒或病毒形式存在 穿梭载体范围:细菌细菌(放线菌),细菌酵 母菌,细菌—真菌,细菌—动物
例：大肠杆菌（E.coli）的噬粒（phagemid）载体既含有 来自质粒的复制起点，又含有来自噬菌体（如M13） 的复制起点。在不同条件下，它可以质粒或噬菌体 的复制起点进行复制，从而获得质粒ds- DNA或噬菌 体ss –DNA 又如：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的某些载体 既含有质粒（2μ）复制起点，又含有ARS片段 b. 不同生物复制起点混合—穿梭载体（shuttle vector） 两种生物中均以质粒形式存在；在一种生物中以质粒形式 存在，在另一种生物中以质粒或病毒形式存在 * 穿梭载体范围：细菌—细菌（放线菌），细菌—酵 母菌， 细菌—真菌，细菌—动物