8.5 7.6 8.7 7.8 8.8 8.2 8.0 8.4 9.2 6 (6)常用缓冲液的pKa值 缓冲液 分子量 缓冲范围 12.1 8.0 7.1~7.9 hEPES 7.47 72~8.2 MPOS 209.3 7.15 6.6~78 piPes 6.2~7.3 MES° 195.2 5.4~6.8 a:三羟甲基氨基甲烷:b:N-2-羟乙基哌嗪N-2-乙磷酸:ε:3-(N-吗啉代)丙磺 N,N’双(2 乙磺酸)哌嗪:ε:2-(N-吗啉代)乙磺酸。 7.温度对常用缓冲液pH的影响 缓冲体系 pKa(20℃) △pKa/10℃ 6.15 -0.110 -0.110
8．5 7．9 7．6 8．6 8．0 7．7 8．7 8．1 7．8 8．8 8．2 7．9 8．9 8．3 8．0 9．0 8．4 8．1 9．1 8．5 8．2 9．2 8．6 8．3 9．3 8．7 8．4 9．4 8．8 8．5 （6）常用缓冲液的 pKa 值 缓冲液 分子量 pKa 值 缓冲范围 Trisa 12.1 8.08 7.1～7.9 HEPESb 283.3 7.47 7.2～8.2 MPOSc 209.3 7.15 6.6～7.8 PIPESd 304.3 6.76 6.2～7.3 MESe 195.2 6.09 5.4～6.8 a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2 -乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。 7．温度对常用缓冲液 pH 的影响 缓冲体系 pKa(20℃) △pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110
PiPes -0085 -0.200 7.15 Mops -0013 7.50 -0.200 Hepes 7.55 -0014 Tricine 8.15 -0.210 Tris 8 -0.310 8.35 -0.1 Glycylglycine -0.280 三、常用酶的配制 溶菌酶 用水配制成5omg/ml的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃 2.蛋白水解酶类 贮存液 贮存温度反应浓度反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7. 8) 链霉蛋白 20℃(溶于 0. 0ImoL/L EDTA 自消化b 水) 0.5% SDS 0.0Imol/L Tris(pH7. 8) 0℃(溶于 蛋白酶K20mgml 0005 mol/L edta37~56℃无须预处理 水) 0.5% SDS
PiPes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0.160 Mops 7.20 -0.013 Tes 7.50 -0.200 Hepes 7.55 -0.014 Tricine 8.15 -0.210 Tris 8.30 -0.310 Bicine 8.35 -0.180 Glycylglycine 8.40 -0.280 三、常用酶的配制 1．溶菌酶 用水配制成 50mg/ml 的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8) 链霉蛋白 酶 a 20mg/ml -20℃（溶于 水） 1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃ 自消化 b 0.5% SDS 0.01mol/L Tris(pH7.8) 蛋白酶 K c 20mg/ml -20℃（溶于 水） 50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37～56℃ 无须预处理 0.5% SDS