离子交换介质的基本性质 常用的离子交换剂 离子交换琼脂糖: 离子交换琼脂糖是携带DEAE或CM基团的 Sepharose CL6B DEAE-Sepharose(阴离子型)和 CM-Sepharose(阳离子型) 的离子交换介质具有硬度大、性质稳定,流速好,分离能力强等优点 尤其是介质受pH和离子强度的影响所引起的膨胀和收缩效应较小,因 此具有稳定的外形体积
离子交换介质的基本性质 常用的离子交换剂 离子交换琼脂糖： 离子交换琼脂糖是携带DEAE或CM基团的Sepharose CL-6B DEAE-Sepharose（阴离子型）和CM-Sepharose（阳离子型） 尤其是介质受pH和离子强度的影响所引起的膨胀和收缩效应较小，因 的离子交换介质具有硬度大、性质稳定，流速好，分离能力强等优点 此具有稳定的外形体积
离子交换介质的选择原则 一般而言: 酸性物质用阴离子交换剂分离 碱性物质用阳离子交换剂分离 氨基酸、核苷酸、蛋白质等两性电解质,可根据其p值及离子化 曲线来选择
离子交换介质的选择原则 一般而言： 酸性物质用阴离子交换剂分离 氨基酸、核苷酸、蛋白质等两性电解质，可根据其pI值及离子化 碱性物质用阳离子交换剂分离 曲线来选择
离子交换介质的选择原则 对p=5的某酸性蛋白质 等电点 当蛋白质为阴离子时, 吸附阴离子交换剂 在pH5.5-9.0的范围内, 应首选DEAE纤维素; 蛋白质净电 pH 5678910 当蛋白质为阳离子时, 荷吸附阳离子交换剂 在pH3.545的范围内, 应首选CM纤维素 pH<pl(+) pH= pl (0) pH> pl(-)
离子交换介质的选择原则 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 pH + - 蛋 白 质 净 电 荷 等电点 吸附阴离子交换剂 吸附阳离子交换剂 pH < pI（+） pH = pI（0） pH > pI（-） 对pI=5的某酸性蛋白质 在pH5.5-9.0的范围内， 当蛋白质为阴离子时， 应首选DEAE纤维素； 在pH3.5-4.5的范围内， 当蛋白质为阳离子时， 应首选CM纤维素
离子交换层析的基本操作 层析柱平衡 ●平衡缓冲液的用量至少为柱体积的2倍 ●平衡缓冲液的流速可略高于正常操作流速 平衡终点以流出液的离子浓度、导电性、pH值与缓冲液一致 为准,其中pH值最重要
离子交换层析的基本操作 层析柱平衡 平衡缓冲液的用量至少为柱体积的 2 倍 平衡缓冲液的流速可略高于正常操作流速 平衡终点以流出液的离子浓度、导电性、pH值与缓冲液一致 为准，其中pH值最重要