柱温箱:30℃。 EX=246nm EM=317nm,PMT=10。 响应时间=4s. 停止时间:出峰 完毕。 Excitation a:激发波长:200-700nm,步 长为1nm,或 Zero order Emission:发射波长:280-900nm,步 长为1nm,或 Zero order PMT:大多数应用适当的设定值为10,若 高浓度样品峰被切平头,则减少PMT值 ●“ Peak width”:大多数应用设为4s,只有 快速分析采用小的设定值。 Multi ex:多波长及光谱(激发)。 Multi em:多波长及光谱(发射) 同时可以输入范围 Range、步长step、采 集光谱。 10、在“ Run time checklist”中选中“Data acquisition”,单击Ok 11、单击“ Method”菜单,选中“ Save me thod as”,输 入一方法名,如“test”,单击Ok。 12、从菜单“View”中选中” Online signal”,选中 Windows1,然后单击 Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中, 点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中 Windows2)
6 ● 柱温箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。 ● 响应时间=4s. 停止时间： 出峰 完毕。 ● Excitation A: 激发波长:200-700nm,步 长为 1nm,或 Zero Order。 ● Emission: 发射波长: 280-900nm, 步 长为 1nm,或 Zero Order。 ● PMT: 大多数应用适当的设定值为 10,若 高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。 ● “Peak width”：大多数应用设为 4s，只有 快速分析采用小的设定值。 ● Multi Ex ： 多波长及光谱（激发）。 ● Multi Em：多波长及光谱（发射）。 ● 同时可以输入范围 Range、步长 step、采 集光谱。 10、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击 Ok。 11、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输 入一方法名，如“test”，单击 Ok。 12、从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中 Windows 1,然后单击 Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中, 点击 Ok.(如同时检测二个信号,则重复 12,选中 Windows 2)
13、从“ Run control”菜单中选择“ Sample info” 选项,如上图所示,输入操作者名称,在“ Data file”中选择“ Manual” 或“ Prefix 区别: Manua1-每次做样之前必须给出新名字,否则仪 器会将上次的数据覆盖。 Prefix一在 Prefix框中输入前缀,在 Counter框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001, vwd0002………。 14、从 Instrument菜单选择 System on。 15、等仪器 Ready,基线平稳,从 Method菜单中选择“Run method”,进样。 (三)、数据分析方法编辑: 1、从“View”菜单中,单击“ Data analysis”进入数据分析 画面。 2、从“File”菜单选择“ Load signal”,选中您的数据文件 名,如下图所示。单击Ok。 3、做谱图优化,从“ Graphics”菜单中选择“ Signal options” 选项,。从 Ranges中选择 Auto scale及合适的显示时间,单击ok, 或选择” Use ranges”调整。反复进行,直到图的比例合适为止 4、积分 (1)、从“ Integration”中选择“ Auto integrate”, 如积分结果不理想,再从菜单中选择“ Integration Events”选项
7 13、从“Run control ”菜单中选择“Sample info” 选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual” 或“Prefix”。 区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪 器会将上次的数据覆盖。Prefix—在 Prefix 框中输入前缀，在 Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如 vwd0001， vwd0002……。 14、从 Instrument 菜单选择 System on。 15、等仪器 Ready，基线平稳，从 Method 菜单中选择“Run method”，进样。 （三）、数据分析方法编辑: 1、从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析 画面。 2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件 名，如下图所示。单击 Ok。 3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options” 选项，。从 Ranges 中选择 Auto scale 及合适的显示时间，单击 ok, 或选择”Use Ranges” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。 4、积分: (1)、从“Integration”中选择 “Auto integrate”, 如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项
选择合适的 Slope sensitivity, Peak width, Area reject, Height reject。 2)、从“ Integration”菜单中选择“ Integrate”选项, 则数据被积分 (3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到 满意为止 (4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法 5、打印报告 (1)、从“ Report”菜单中选择“ Specify report”选项, 进入如上画面。 (2)、单击“ Quantitative Results”框中 Calculate 右侧的黑三角,选中 Percent(面积百分比),其它选项不变 (3)、单击Ok (4)、从“ Report”菜单中选择“ Print report”,则报 告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则单击 Report底部 的“ Print”钮 (四)、关机: ●关机前,用100%的水冲洗系统20分钟,然后用有 机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵,(适于反相色谱柱)。 [正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
8 选择合适的 Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 (2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项， 则数据被积分。 (3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到 满意为止。 (4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。 5、打印报告: (1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项， 进入如上画面。 (2)、单击“Quantitative Results”框中 Calculate 右侧的黑三角，选中 Percent（面积百分比），其它选项不变。 (3)、单击 Ok. (4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报 告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击 Report 底部 的“Print”钮。 (四)、关机: ● 关机前，用 100%的水冲洗系统 20 分钟，然后用有 机溶剂冲洗系统 10 分钟（如 ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。 [正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
●退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down关 关掉 Agilent1100电源开关。 Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项 1、色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(如ACN 适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相) 2、对于手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时搬 动进样阀数次,每次数毫升。 3、流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。 4、带seal-wash的1100,要配制90%水+10%异丙醇,以每分2—3滴 的速度虹吸排出,溶剂不能干涸。 5、其它主意事项见说明书,或由现场工程师介绍。 维护知识问答 、为什么溶剂和样品要过滤? 溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用, 消除由于污染对分析结果的影响。 色谱柱:由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小 颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞 仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也 会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 样品过滤头的类型
9 ● 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用 shut down 关）。 关掉 Agilent 1100 电源开关。 Agilent1100 高压液相色谱仪维护保养知识保养事项： 1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如 ACN 适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相） 2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬 动进样阀数次，每次数毫升。 3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。 4、带 seal-wash 的 1100，要配制 90%水+10%异丙醇，以每分 2—3 滴 的速度虹吸排出，溶剂不能干涸。 5、其它主意事项见说明书，或由现场工程师介绍。 维护知识问答 1、为什么溶剂和样品要过滤? 溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用， 消除由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小 颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也 会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 样品过滤头的类型：
30mm内径:适用于大进样量的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格, 材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50μl。 13mm内径:适用于范围广的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格,材 料为纤维素。 3m内径:适用于小进样量的过滤,由0.2μm和0.45μm两种规格 处理样品体积为7μ1。 滤膜类型: 聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐,并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜:不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶液,推荐用于 蛋白质和其相关样品 尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸,70% 乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜:具有蛋白吸收低,同样适用水溶性样品和有机溶剂 2、为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项? HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现 象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杄上,随着蓝宝石 活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现 象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲 盐的浓度在0.lmol或大于0.lmol时,必须使用该在线冲洗选项 清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长 和减小水的表面张力。以2-3滴/min的速度虹吸流下,不能干涸。 3、为什么 Agilent110oLC的流动相管路非常细?
10 30mm 内径：适用于大进样量的过滤，由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格, 材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于 50μl。 13mm 内径：适用于范围广的过滤，由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格,材 料为纤维素。 3mm 内径：适用于小进样量的过滤，由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格。 处理样品体积为 7μl。 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于 蛋白质和其相关样品。 尼龙 66 滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70% 乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。 2、为什么 HPLC 用缓冲盐时要加在线 Seal-wash 选项？ HPLC 用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现 象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石 活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现 象。在线 Seal-wash 选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲 盐的浓度在 0.1mol 或大于 0.1mol 时,必须使用该在线冲洗选项. 清洗液配制: 90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长 和减小水的表面张力。以 2-3 滴/min 的速度虹吸流下，不能干涸。 3、为什么 Agilent 1100LC 的流动相管路非常细?