DNA replication at phase S of cell cycleMG21hmammalian cellE.coli37℃G13-4hs0.5 h22-25hrs12hs500-5000bp/minS105 bp/min6-8hs福
DNA replication at phase S of cell cycle E.coli 37 ℃ 0.5 h 105 bp/min S 6-8hs M G2 1h 3-4hs mammalian cell 22-25hrs 500-5000 bp/min G1 12hs ?
复制机理的复杂性D.S. DNAS.S.DNA能量的供求超螺旋线状，开环状构型的变化多种酶类的互作Replisome(修复，校正）复制的准确性研究试材的特殊性（温度敏感型ts，突变抑制体系Su）DNA复制速度(E.coli105bp/min，高速旋转100km/h！?）缺乏统一的模式(D.S. DNA, S.S. DNA, Linear DNA....)
• 复制机理的复杂性 D.S. DNA S.S. DNA 能量的供求 构型的变化 超螺旋 线状，开环状 多种酶类的互作 Replisome 复制的准确性 （修复，校正） 研究试材的特殊性 （温度敏感型ts，突变抑制体系Su） DNA复制速度 (E.coli 105 bp/min ，高速旋转 100km/h ！?) 缺乏统一的模式 (D.S. DNA, S.S. DNA, Linear DNA.)
3.2复制起点与方向(replication origin & direction
3.2 复制起点与方向 （replication origin & direction ）
isolation of oriCoriCECofDNARERERestrictionRestrictionendonucleaseendonucleaseoriAmpetc,LigaseoncAmeTransformation,plate.onampicillinNo growthGrowthNogrowth
isolation of oriC
复制起点的特征AutonomouslyReplicatingSequence(ARS)245bpminimal originofreplication richATinProk中aDNApolymerase (DnaA)binding site50100BgillBgillGGATCCTGgnTATTAAAAAGAAGATCTnTTTATTAGAGATCTGTTnTATTGTGATCTCTTATTAGGATCGnnntnnnnTGTGGATAAgnngGATCCnnnAT0000CACTGCCCCAAGGGCGGoricCOOGTGTGGCCGCCAGGCAG-ACTCTCTAGTCGACGTAGGCTTGTCTGTCGCGACATGACGTCGTGTTCGTTTATTCAT20010115--1RNApol bootupprimer!CACAgCtCAAnTTtAAGATCAAnnnnnTggnAAGGATCncTAnCTGTGAATGATCGGTGATATT<CAACC GGAATAAAAACAGGTACATTGCGTGGAGcCOATACATTTAAGGGTAACGCTAAGTGAAGGAGCCGTT AAGGCTTTATTTGTAcACGGAAGAGAAGGCGTCT+201250AAAnCgnACaaCGGTTaTTCTTTGGATAACTACCGGTTGATCCAAGCTTTtnAnCAgAGTTATCCACAntnGAnnGcnn-GAT:ConsensussequenceGGGTATCCACEscherichiaCTGAAAACCTGAATC.AACCCGTATGCACSalmonellaGTGAATCTGGGGGAAAGCTGCGGCATEnterobacteAAAATAGTGAAAATAT-KlebsiellaTTCAGGTTCGGGGCTTA ACCAGAA TAGTTCACTCCG-AErwiniaACGCA
复制起点的特征 Autonomously Replicating Sequence（ARS） J. W. Zyskind ：确定E.coli oriC其最小区段为245bp， 5种细菌的oriC序列进行比较分析发现； a）245bp minimal origin of replication rich AT in Prok . DNA polymerase (DnaA) binding site oriC RNA pol boot up primer！