分枝杆菌分枝杆菌属(Mycobacterium）是一类细长略弯曲的，有时有分枝或出现丝状体。目前在分类学上已将分枝杆菌属归纳于放线菌中。对人致病的放线菌可分含和不含分枝菌酸两类。分枝杆菌属于含分枝菌酸类。中文学名分枝杆菌拉丁学名Mycobacterium别称抗酸杆菌界细菌界主要特点细胞壁含有大量脂质分类结核分枝杆菌复合群目录1.1概述2.2分类3.3第一节结核分枝杆菌4.·形态与染色5.·代谢6.·培养特性1.：生化反应2.·抵抗力3.·变异性4.·致病物质
分枝杆菌 分枝杆菌属(Mycobacterium)是一类细长略弯曲的，有时有分枝或出现丝状体。 目前在分类学上已将分枝杆菌属归纳于放线菌中。对人致病的放线菌可分含和不 含分枝菌酸两类。分枝杆菌属于含分枝菌酸类。 中文学名 分枝杆菌 拉丁学名 Mycobacterium 别 称 抗酸杆菌 界 细菌界 主要特点 细胞壁含有大量脂质 分 类 结核分枝杆菌复合群 目录 1. 1 概述 2. 2 分类 3. 3 第一节 结核分枝杆菌 4. ▪ 形态与染色 5. ▪ 代谢 6. ▪ 培养特性 1. ▪ 生化反应 2. ▪ 抵抗力 3. ▪ 变异性 4. ▪ 致病物质
5.：肺部感染6.·肺外感染7.·免疫性8.·微生物学检查法1.·防治原则2.4第二节非结核分枝杆菌3.·第组：光产色菌(photochromogen)4.·第II组：暗产色菌（scotochromogen）5.·第IV组：迅速生长菌（rapidgrower）1.5第三节麻风分枝杆菌2.·生物学特性3.·致病性与免疫性4.·微生物学检查法5.·防治原则概述本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸。这和其染色性、生长特性、致病性、抵抗力等密切相关。一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌（acid-fastbacilli)。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有关。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。分类分枝杆菌种类较多，可分为结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌三类。非结核分枝杆菌根据生长速度和产色等不同又分为4组
5. ▪ 肺部感染 6. ▪ 肺外感染 7. ▪ 免疫性 8. ▪ 微生物学检查法 1. ▪ 防治原则 2. 4 第二节 非结核分枝杆菌 3. ▪ 第Ⅰ组：光产色菌(photochromogen) 4. ▪ 第Ⅱ组：暗产色菌(scotochromogen) 5. ▪ 第Ⅳ组：迅速生长菌(rapid grower) 1. 5 第三节 麻风分枝杆菌 2. ▪ 生物学特性 3. ▪ 致病性与免疫性 4. ▪ 微生物学检查法 5. ▪ 防治原则 概述 本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸。这和其染色性、 生长特性、致病性、抵抗力等密切相关。一般不易着色，若经加温或延长染色时 间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌(acid-fast bacilli)。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有 关。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。 分类 分枝杆菌种类较多，可分为结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆 菌三类。非结核分枝杆菌根据生长速度和产色等不同又分为 4 组
第一节结核分枝杆菌编辑结核分枝杆菌(M.tuberculosis），俗称结核杆菌或结核菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见（因为喜氧性）。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。一、 生物学性状形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4μm（图14-1A)。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolicacid)包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用姜-尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，以5%石碳酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。近年发现结核分枝杆菌在细胞壁外尚有一层膜。一般因制片时遭受破坏而不易看到。若在制备电镜标本固定前用明胶处理，可防止荚膜脱水收缩。在电镜下可看到菌体外有一层较厚的透明区，即荚膜，荚膜对结核分枝杆菌有一定的保护作用。代谢结核分枝杆菌在体内外经青霉素、环丝氨酸或溶菌酶诱导可影响细胞壁中肽聚糖的合成，异烟肼影响分枝菌酸的合成，巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后溶菌酶的作用可破坏肽聚糖，均可导致其变为L型，呈颗粒状或丝状（图14-1B与C）。异烟肼影响分枝菌酸的合成，可变为抗酸染色阴性。这种形态多形染色多变在肺内外结核感染标本中常能见到。临床结核性冷脓疡和痰标本中甚至还可见有非抗酸性革兰阳性颗粒，过去称为Much颗粒。该颗粒在体内或细胞培养中能返回为抗酸性杆菌，故亦为L型。培养特性专性需氧。最适温度为37℃，低于30℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时1824h，营养丰富时只需5h
第一节 结核分枝杆菌 编辑 结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌或结核菌，是引起结核病的病原 菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见(因为喜氧性)。结核病至今仍为重 要的传染病。估计世界人口中 1/3 感染结核分枝杆菌。据 WHO 报道，每年约有 800 万新病例发生，至少有 300 万人死于该病。我国建国前死亡率达 200-300 人 /10 万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善， 特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降 低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫 困等原因，发病率又有上升趋势。 一、 生物学性状 形态与染色 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小 1～4X0.4 μm（图 14-1A)。牛分枝 杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的 60%，特 别是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿 入。分枝杆菌一般用萋-尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以 5% 石碳酸复红加 温染色后可以染上，但用 3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆 菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 近年发现结核分枝杆菌在细胞壁外尚有一层荚膜。一般因制片时遭受破坏而不易 看到。若在制备电镜标本固定前用明胶处理，可防止荚膜脱水收缩。在电镜下可 看到菌体外有一层较厚的透明区，即荚膜，荚膜对结核分枝杆菌有一定的保护作 用。代谢 结核分枝杆菌在体内外经青霉素、环丝氨酸或溶菌酶诱导可影响细胞壁中肽聚糖 的合成，异烟肼影响分枝菌酸的合成，巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后溶菌酶的作 用可破坏肽聚糖，均可导致其变为 L 型，呈颗粒状或丝状（图 14-1B 与 C）。异 烟肼影响分枝菌酸的合成，可变为抗酸染色阴性。这种形态多形染色多变在肺内 外结核感染标本中常能见到。临床结核性冷脓疡和痰标本中甚至还可见有非抗酸 性革兰阳性颗粒，过去称为 Much 颗粒。该颗粒在体内或细胞培养中能返回为抗 酸性杆菌，故亦为 L 型。 培养特性 专性需氧。最适温度为 37℃，低于 30℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含 量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂 1 代需时 18～24h，营养丰富时只需 5h
初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固体培养的阳性率高数倍。生化反应结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别在子结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义。结核分枝杆菌大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性：非结核分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验检查方法是将浓的细菌悬液置68?C水浴加温20min，然后再加H202。观察是否产生气泡，有气泡者为阳性。抵抗力结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热62～63℃15min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。结核分枝杆菌的抵抗力与环境中有机物的存在有密切关系，如痰液可增强结核分枝杆菌的抵抗力。因大多数消毒剂可使痰中的蛋白质凝疑固，包在细菌周围，使细菌不易被杀死。5%石碳酸在无痰时30min可杀死结核分枝杆菌，有痰时需要24h；5%来苏儿无痰时5min杀死结核分枝杆菌，有痰时需要12h。结核分枝杆菌对酸（3%HC1或6%H2S04）或碱（4%NaOH）有抵抗力，15min不受影响。可在分离培养时用于处理有杂菌污染的标本和消化标本中的粘稠物质。结核分枝杆菌对1：13000孔雀绿有抵抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长。结核分枝杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等敏感，但长期用药容易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性<5%。变异性结核分枝杆菌可发生形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。卡介苗（BCG）就是Calmette和Guerin2人（1908)将牛结核分枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得的减毒活疫苗株，现广泛用于预防接种。结核分枝杆菌易发生耐药性。在固体培养基中对常用的含异烟肼1?g、链霉素10?g、利福平50?g能生长的结核分枝杆菌为耐药菌。耐药菌株毒力有所减弱。异烟肼可影响细胞壁中分枝菌酸的合成，诱导结核分枝杆菌成为L型，此可能是耐异烟肼的一种原因。药物敏感试验表明对异烟肼耐药，而对利福平和链霉素大多仍敏感。故目前治疗多主张异烟肼和利福平或吡嗪酰胺联合用药，以减少耐药
初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培 养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制杂菌生长， 便于分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一 般 2～4 周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透 明。在液体培养基中可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一般 1～2 周 即可生长。临床标本检查液体培养比固体培养的阳性率高数倍。 生化反应 结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别在于结核分枝杆菌可合成烟酸和 还原硝酸盐，而牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝 杆菌有重要意义。结核分枝杆菌大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性; 非结 核分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验检查方法是将浓的细菌悬液置 68?C 水浴加温 20min，然后再加 H2O2。 观察是否产生气泡，有气泡者为阳性。 抵抗力 结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在 70%乙醇中 2min 死亡。此 外，脂质可防止菌体水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传 染性 8～10d，在干燥痰内可存活 6～8 个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体 中加热 62～63℃ 15min 或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌对紫外线敏感。直接日 光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。 结核分枝杆菌的抵抗力与环境中有机物的存在有密切关系，如痰液可增强结核分 枝杆菌的抵抗力。因大多数消毒剂可使痰中的蛋白质凝固，包在细菌周围，使细 菌不易被杀死。5% 石碳酸在无痰时 30min 可杀死结核分枝杆菌，有痰时需要 24h; 5% 来苏儿无痰时 5min 杀死结核分枝杆菌，有痰时需要 1～2h。 结核分枝杆菌对酸（3% HCl 或 6% H2SO4) 或碱（4% NaOH) 有抵抗力，15min 不 受影响。可在分离培养时用于处理有杂菌污染的标本和消化标本中的粘稠物质。 结核分枝杆菌对 1：13 000 孔雀绿有抵抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长。结 核分枝杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨 基水杨酸等敏感，但长期用药容易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性<5%。 变异性 结核分枝杆菌可发生形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。卡介苗（BCG） 就是 Calmette 和 Guerin 2 人(1908)将牛结核分枝杆菌在含甘油、胆汁、马铃薯 的培养基中经 13 年 230 次传代而获得的减毒活疫苗株，现广泛用于预防接种。 结核分枝杆菌易发生耐药性。在固体培养基中对常用的含异烟肼 1?g、链霉素 10?g、利福平 50?g 能生长的结核分枝杆菌为耐药菌。耐药菌株毒力有所减弱。 异烟肼可影响细胞壁中分枝菌酸的合成，诱导结核分枝杆菌成为 L 型,此可能是 耐异烟肼的一种原因。药物敏感试验表明对异烟肼耐药，而对利福平和链霉素大 多仍敏感。故目前治疗多主张异烟肼和利福平或吡嗪酰胺联合用药，以减少耐药
性的产生，增强疗效。临床上耐异烟肼菌株致病性也有所减弱。实验证明豚鼠感染结核分枝杆菌常于6周内死亡，且肝内见有栗粒性病灶；而感染L型后往往要百余天才死亡，病灶缺乏典型结核结节病变。但L型有回复的特性，未经彻底治疗可导致复发。近年来世界各地结核分枝杆菌的多耐菌株逐渐增多，甚至引起暴发流行。结核分枝杆菌的耐药可由自发突变产生（原发性耐药）或由用药不当经突变选择产生（继发性耐药）。但多耐的产生主要可能由于后者。耐药基因在染色体上，对不同药物的耐药基因不相连接，所以联合用药治疗有效。对异烟肼耐药与katG基因去失有关。易感株有该基因，耐药株无。利福平主要作用于RNA多聚酶。编码该酶的基因(rpoB)突变则引起对利福平耐药。1999年国内报道7株耐利福平株全部rpoB基因发生突变。敏感株则否。二、致病性结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。致病物质与荚膜、脂质和蛋白质有关。1.荚膜荚膜的主要成分为多糖，部分脂质和蛋白质。其对结核分枝杆菌的作用有：荚膜能与吞噬细胞表面的补体受体3（CR3）结合，有助于结核分枝杆菌在宿主细胞上的粘附与入侵：②荚膜中有多种酶可降解宿主组织中的大分子物质，供入侵的结核分枝杆菌繁殖所需的营养；③膜能防止宿主的有害物质进入结核分枝杆菌，甚至如小分子NaOH也不易进入。故结核标本用4%NaOH消化时，一般细菌很快杀死，但结核分枝杆菌可耐受数十分钟。结核分枝杆菌入侵后荚膜还可抑制吞噬体与溶酶体的融合。2．脂质据实验研究细菌毒力可能与其所含复杂的脂质成分有关，特别是糖脂更为重要。①索状因子：是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖脂。能使细菌在液体培养基中呈蜿蜓索状排列（图14-2）。此因子与结核分枝杆菌毒力密切相关。它能破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。若将其从细菌中提出，则细菌丧失毒力。②磷脂：能促使单核细胞增生，并使炎症灶中的巨噬细胞转变为类上皮细胞，从而形成结核结节。③硫酸脑苷脂（sulfatide)：可抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，使结核分枝杆菌能在吞噬细胞中长期存活。④蜡质D：是一种肽糖脂和分枝菌酸的复合物，可从有毒株或卡介苗中用甲醇提出，具有佐剂作用，可激发机体产生迟发型超敏反应。3.蛋白质有抗原性，和蜡质D结合后能使机体发生超敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状，并在形成结核结节中发挥一定作用。所致疾病结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。因肠道中有大量正常菌群寄居，结核分枝杆菌必须通过竞争才能生存并和易感细胞粘附。肺泡中
性的产生，增强疗效。临床上耐异烟肼菌株致病性也有所减弱。实验证明豚鼠感 染结核分枝杆菌常于 6 周内死亡，且肝内见有粟粒性病灶; 而感染 L 型后往往要 百余天才死亡，病灶缺乏典型结核结节病变。但 L 型有回复的特性，未经彻底治 疗可导致复发。 近年来世界各地结核分枝杆菌的多耐菌株逐渐增多，甚至引起暴发流行。结核分 枝杆菌的耐药可由自发突变产生（原发性耐药）或由用药不当经突变选择产生（继 发性耐药）。但多耐的产生主要可能由于后者。耐药基因在染色体上，对不同药 物的耐药基因不相连接，所以联合用药治疗有效。对异烟肼耐药与 katG 基因丢 失有关。易感株有该基因，耐药株无。利福平主要作用于 RNA 多聚酶。编码该酶 的基因(rpoB)突变则引起对利福平耐药。1999 年国内报道 7 株耐利福平株全部 rpoB 基因发生突变。敏感株则否。 二、致病性 结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引 起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有 关。致病物质 与荚膜、脂质和蛋白质有关。 1.荚膜 荚膜的主要成分为多糖，部分脂质和蛋白质。其对结核分枝杆菌的作用 有：①荚膜能与吞噬细胞表面的补体受体 3（CR3）结合，有助于结核分枝杆菌 在宿主细胞上的粘附与入侵；②荚膜中有多种酶可降解宿主组织中的大分子物 质，供入侵的结核分枝杆菌繁殖所需的营养；③荚膜能防止宿主的有害物质进入 结核分枝杆菌，甚至如小分子 NaOH 也不易进入。故结核标本用 4% NaOH 消化时， 一般细菌很快杀死，但结核分枝杆菌可耐受数十分钟。结核分枝杆菌入侵后荚膜 还可抑制吞噬体与溶酶体的融合。 2．脂质 据实验研究细菌毒力可能与其所含复杂的脂质成分有关，特别是糖脂 更为重要。 ①索状因子 ： 是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖脂。能使细菌在液体培养基中 呈蜿蜒索状排列（图 14-2）。此因子与结核分枝杆菌毒力密切相关。它能破坏 细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。若将其从细 菌中提出，则细菌丧失毒力。 ②磷脂：能促使单核细胞增生，并使炎症灶中的巨噬细胞转变为类上皮细胞，从 而形成结核结节。 ③硫酸脑苷脂(sulfatide)：可抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，使结核 分枝杆菌能在吞噬细胞中长期存活。 ④蜡质 D： 是一种肽糖脂和分枝菌酸的复合物，可从有毒株或卡介苗中用甲醇 提出，具有佐剂作用，可激发机体产生迟发型超敏反应。 3.蛋白质 有抗原性，和蜡质 D 结合后能使机体发生超敏反应，引起组织坏死和 全身中毒症状，并在形成结核结节中发挥一定作用。 所致疾病 结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体，引起 多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。因肠道中有大量 正常菌群寄居，结核分枝杆菌必须通过竞争才能生存并和易感细胞粘附。肺泡中