三、剪切型核酶 。1、自身催化剪切型RNA 1、1剪切机制 1、2结构与功能的关系 錘头结构(Hammerhead) 发夹结构(Hairpin) 斧头结构(Axehead) 假结样结构Pseudoknot-like) 1、3 影响核酶活性的因素
三、剪切型核酶 ⚫ 1、自身催化剪切型RNA ⚫ 1、1 剪切机制 ⚫ 1、2 结构与功能的关系 ⚫ 锤头结构 (Hammerhead) ⚫ 发夹结构(Hairpin) ⚫ 斧头结构(Axehead) ⚫ 假结样结构(Pseudoknot-like) ⚫ 1、3 影响核酶活性的因素
○2、异体催化剪切型RNA ●核糖核酸酶P(RNaseP)是内切核酸酶，是核 糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的 5‘端，除去多余的序列，形成3？-OH和5’ 磷酸末端。 ●RNaseP由MIRNA和蛋白质亚基组成。 ●体外：M1RNA具催化作用 蛋白质作为辅助因子 ●体内：M1RNA和蛋白质对酶活性都是必需的。 ●2、1剪切机制 Mg 2+ 2、2结构与功能的关系 M1RNA5‘端完 整结构对维持催化活性是必需的
⚫2、异体催化剪切型RNA ⚫ 核糖核酸酶P(RNaseP)是内切核酸酶，是核 糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的 5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH 和 5’- 磷酸末端。 ⚫ RNaseP由M1RNA和蛋白质亚基组成。 ⚫体外： M1RNA具催化作用 ⚫ 蛋白质作为辅助因子 ⚫体内： M1RNA和蛋白质对酶活性都是必需的。 ⚫ 2、1剪切机制 Mg 2+ ⚫ 2、2结构与功能的关系 M1RNA 5‘端完 整结构对维持催化活性是必需的
B C OQ-COCUCUAAUO CACCC RNaseP可剪切 前体5‘端41nt,5 C.O 端成熟。不同 箭誉c4ae. 剪切位点 RNA的5’端没 0.c 1 有顺序共同性，剪 切的准确性与剪切 部位周围的核苷酸 C36 顺序无关，表明在 G36 RNaseP的组分内 EGS 没有引导序列， RNaseP所识别的 是底物的高级结构。 RNaseP底物的二级结构
RNaseP可剪切 前体5‘端41nt, 5’ 端成熟。不同 tRNA的 5’ 端没 有顺序共同性，剪 切的准确性与剪切 部位周围的核苷酸 顺序无关，表明在 RNaseP的组分内 没有引导序列， RNaseP所识别的 是底物的高级结构。 RNaseP底物的二级结构 剪切位点
G)(399nt) (4nt)- (环状395nt) (395mt) G-IVS L-191VS IO RNA (414nt) 5'GA G 3' B一消除 催化剂 (394nt) P GGAGGG- GA- + 22 27 (15nt) (环状399mt) 图12一2 L-19IVS(395nt)和394 nt RNA的形成
L-19 IVs Gog:3' 1、转核苷酸作用 C.G.CA,CnG。45 2CpCpCpCpC- CpCpCpCpCpC .Co -c,- +CpCpCpC 43 2、水解作用 S C.C.C.CrCe 3 GG-CiAriGr 5' CpCpCpCpC -CpCpCpC pC “C。 一(i.(G3岁 3、转磷酸作用 一(i,《rA(5 CpCpCpCpCpCp+UpCpU 《人(4 CpCpCpCpCpC UpCpUp G(5.3 4、去磷酸作用 GGAGC5' CpCpCpCpCp-CpCpCpCpC +Pi CxpC.CC-Co 5、限制性内切酶作用 “ 3 CpUpCpUpN-+G-CpUpCpU -《.《UwA,GU05 +GpN- 图12一3L-191VS转核 苷酸作用机制
1、转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC +CpCpCpC 2、水解作用 CpCpCpCpC CpCpCpC + pC 3、转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp+UpCpU CpCpCpCpCpC + UpCpUp 4、去磷酸作用 CpCpCpCpCp CpCpCpCpC +Pi 5、限制性内切酶作用 CpUpCpUpN +G CpUpCpU +GpN