啦叫、蛋白质含量的测定 考马斯亮蓝G250法,紫外吸收法
实验四、蛋白质含量的测定 考马斯亮蓝G250法，紫外吸收法
基本原理 利用某些物质的分子吸收紫外光、可见光、 红外光和激光200800mm光谱区的辐射來进行 欠性定量分析和物质结构分析测定的方法。称为 分光光度法或分光光度技术,使用的仪器称为分 光光度计。 这种分光光度计灵敏度高,测定速度快, 应用范围广,其中的紫外/可见分光光度技术更是 生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一
一、基本原理 • 利用某些物质的分子吸收紫外光、可见光、 红外光和激光200 ~ 800 nm光谱区的辐射来进行 定性定量分析和物质结构分析测定的方法。称为 分光光度法或分光光度技术，使用的仪器称为分 光光度计。 • 这种分光光度计灵敏度高，测定速度快， 应用范围广，其中的紫外/可见分光光度技术更是 生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一
紫外区可分为紫外(近紫外)和真空紫外 (远素外)。由于吸收池(又称样品池、 比色杯芍)和光学元件以及氧气能吸收小 于190m波长的光,因此常规紫外测定集 中在近紫外区,即200nm-400m。可见光 区为400nm800nm
• 紫外区可分为紫外（近紫外）和真空紫外 （远紫外）。由于吸收池（又称样品池、 比色杯等）和光学元件以及氧气能吸收小 于190nm波长的光，因此常规紫外测定集 中在近紫外区，即 200nm-400nm。可见光 区为400nm -800nm
测定某物质的紫外吸收光谱的曲线,·可与己 知标准的紫外光谱囹相对照,对照时须注意测定的 条件,如溶剂、浓度等。 常用标准的紫处吸收光谱是萨德勒研究实验 司编制的“ Sadtler紫外标准图谱集,到七十年 代末为止巴收集28585个化合物紫外光谱图。此外 还有药物和非极性溶剂紫外光谱图2000多幅。 由于化合物紫外吸收峰较少,而且峰形都很 宽,不象红外光谱是许多指纹峰,所以在用萦外吸 收光谱进行化合物定性鉴定时,应注意:化合物相 同,其紫外光谱应完全相同:但是紫外光谱相同不 定化合物就相同可能仅是存在某些相同的发色 团或基团,因此在鉴定时应与红外光谱相结合
• 测定某物质的紫外吸收光谱的曲线，可与已 知标准的紫外光谱图相对照，对照时须注意测定的 条件，如溶剂、浓度等。 常用标准的紫处吸收光谱是萨德勒研究实验 公司编制的“Sadtler”紫外标准图谱集，到七十年 代末为止已收集28585个化合物紫外光谱图，此外 还有药物和非极性溶剂紫外光谱图2000多幅。 由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很 宽，不象红外光谱是许多指纹峰，所以在用紫外吸 收光谱进行化合物定性鉴定时，应注意：化合物相 同，其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不 一定化合物就相同，可能仅是存在某些相同的发色 团或基团，因此在鉴定时应与红外光谱相结合
1, Beer-Lambert定律 明伯一比尔光吸收定律 A=-lgT=ab C A:吸光度,又称光密度“O.D。 丁:透光度,T=I/ I。为照射到吸收池上的光强, 为透过吸收池的光强) E:摩尔吸光系数或克分子吸光系数(Lmol-1cm-1)。 b:样品光程(cm),通常使用1.0cm的吸收地, b=1cm。 C:样品浓度(mo/L)。 由上式可以看出:吸光度A与物质的吸光系数“E”和 物质的浓度“C”成正比
1. Beer-Lambert 定律 朗伯-比尔光吸收定律： A＝－lgT＝εb c A：吸光度，又称光密度“O.D”。 T：透光度， T＝I / I。（ I。为照射到吸收池上的光强， I为透过吸收池的光强） ε：摩尔吸光系数或克分子吸光系数（L·mol－1·cm－1）。 b：样品光程（cm），通常使用1. 0cm 的吸收地， b=1cm。 c：样品浓度（mol/L）。 由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“ε”和 物质的浓度“C”成正比