医学波传节实验于因 【注意的问恩】 1,采血时不要加入太多的肝素，因为肝素含量过多时往往抑制淋巴细胞 的转化。 2.培养过程中培养液逐渐变黄色，说明发生了较大变化，将不利于 细胞生长，此时可加入适量灭菌的1.4%NC0,溶液调整，或再加入2-3ml 培养液的办法来校止。 3.培养失败的原因，一般有下述几种：①培养瓶及器材洗涤不符合要求： ②配制溶液的双蒸水不符合要求：③P和培养液的质量有问题，或培养液 p不符合要求：④无菌操作不符合要求，发生污染：⑤淋巴细胞对PHA反应 降低，致分裂相太少。 4.标木质量不佳的原因：①秋水仙素的处理不当，如秋水仙素的浓度不 够或处理时间不足，结果分裂相太少：如浓度过高或处理时间过长，则使染 色体过于缩短，难于进行分析：②低海处理不当，低渗处理时间过长时，细 胞膜往往过早破裂，染色体丢失：如果低渗处弹不够，则染色体分散不佳， 难以进行计数分析：③高心速度不合适，收集细胞时离心的速度太低易丢失 细胞，如果低渗后高心速度过高，往往使分裂相过早破裂，完整的分裂相减 少：④标本固定不充分，如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质量不佳，结 果染色体模潮，或残留胞浆痕迹，使背景不清：⑤玻片去污不彻底，冷冻不 够，使细胞悬液不能均匀附若以致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。 5.制备G显带染色体标本时，要严格控制肤髯消化时间，时间不足显不 出带纹，时间过长，使染色体不规则或形成空泡状 附录 一、试剂及配制： 1、RPWI1640培养液 RPMI1640 10.4g 肝素 80ng PHA 182mg 胎牛血清 100m1 抗菌素 8万单位 NaHCO3 2g 双蒸水定容至1000m1。 抽滤除菌，分装，-20℃保存待用。 11 中国医科大学医学道传学教研室
医学遗传学实验手册 11 中国医科大学医学遗传学教研室 【注意的问题】 1．采血时不要加入太多的肝素，因为肝素含量过多时往往抑制淋巴细胞 的转化。 2．培养过程中培养液逐渐变黄色，说明 pH 发生了较大变化，将不利于 细胞生长，此时可加入适量灭菌的 1.4% NaHCO3溶液调整，或再加入 2～3ml 培养液的办法来校正。 3．培养失败的原因，一般有下述几种：①培养瓶及器材洗涤不符合要求； ②配制溶液的双蒸水不符合要求；③PHA 和培养液的质量有问题，或培养液 pH 不符合要求；④无菌操作不符合要求，发生污染；⑤淋巴细胞对 PHA 反应 降低，致分裂相太少。 4．标本质量不佳的原因：①秋水仙素的处理不当，如秋水仙素的浓度不 够或处理时间不足，结果分裂相太少；如浓度过高或处理时间过长，则使染 色体过于缩短，难于进行分析；②低渗处理不当，低渗处理时间过长时，细 胞膜往往过早破裂，染色体丢失；如果低渗处理不够，则染色体分散不佳， 难以进行计数分析；③离心速度不合适，收集细胞时离心的速度太低易丢失 细胞，如果低渗后离心速度过高，往往使分裂相过早破裂，完整的分裂相减 少；④标本固定不充分，如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质量不佳，结 果染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；⑤玻片去污不彻底，冷冻不 够，使细胞悬液不能均匀附着以致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。 5．制备 G 显带染色体标本时，要严格控制胰酶消化时间，时间不足显不 出带纹，时间过长，使染色体不规则或形成空泡状。 附 录 一、试剂及配制： 1、RPMI1640 培养液 RPMI1640 10.4g 肝素 80mg PHA 182mg 胎牛血清 100ml 抗菌素 8 万单位 NaHCO3 2g 双蒸水定容至 1000ml。 抽滤除菌，分装，-200 C 保存待用
医学遗传学实验于厢 2、低卷液(0.075 Mol KC1) KCI 2.794g 三蒸水 500ml 3、固定液 甲醇(AR):冰醋酸(AR)=3:1 现用现配。 4、GieI3a染液 贮存液 Giemsa 5g 纯甘油(AR)330a1 甲醇(AR) 33ml 先将Giem5a粉剂溶于少量的甘油中，在研体中充分研磨至无颗粒粘糊状， 再将全部甘油加入，然后移至烧杯中，在55-60℃温箱中放置2小时， 冷却后加入甲醇，充分搅拌均匀，在室温放置2一3周后过滤除去絮状物， 储存在棕色瓶中，一般放置3周后使用效果更好。 使用液 磷酸缓冲液甲、乙各2.5ml,加45ml双蒸水，加Giem5n原液2.5ml, 5、2.5%胰蛋白酶原液 映蛋白酶粉剂 2.5g 生理盐水 100ml 6、秋水仙素(10mg/ml,使用液100μg/ml) 秋水仙素 1g 生理盐水 100ml 抽滤，4℃棕色瓶保存。 7、肝素(2500U/ml, 使用浓度50U/ml) 肝素钠 312.5g 生理盐水 100ml 高压灭菌 8、Hanks液(g/L) NaCl 8.00 KC1 0.40 CaCl: 0.14 MgS0,7HO 0.20 Na:HIP0. 0.06 KH.PO, 0.06 NaHCO, 0.35 12 中因医料大学医学遭传学教研室
医学遗传学实验手册 12 中国医科大学医学遗传学教研室 2、低渗液（0.075Mol KCl） KCl 2.794 g 三蒸水 500ml 3、固定液 甲醇（AR）：冰醋酸（AR）=3：1 现用现配。 4、Giemsa 染液 贮存液 Giemsa 5g 纯甘油（AR） 330ml 甲醇 （AR） 33ml 先将 Giemsa 粉剂溶于少量的甘油中，在研钵中充分研磨至无颗粒粘糊状， 再将全部甘油加入，然后移至烧杯中，在 55～60O C 温箱中放置 2 小时， 冷却后加入甲醇，充分搅拌均匀，在室温放置 2～3 周后过滤除去絮状物， 储存在棕色瓶中，一般放置 3 周后使用效果更好。 使用液 磷酸缓冲液甲、乙各 2.5ml，加 45ml 双蒸水，加 Giemsa 原液 2.5ml。 5、2.5%胰蛋白酶原液 胰蛋白酶粉剂 2.5g 生理盐水 100ml 6、秋水仙素（10mg/ml，使用液 100μg/ml） 秋水仙素 1g 生理盐水 100ml 抽滤，4 O C 棕色瓶保存。 7、肝素（2500U/ml，使用浓度 50U/ml） 肝素钠 312.5 mg 生理盐水 100ml 高压灭菌。 8、Hanks 液（g/L） NaCl 8.00 KCl 0.40 CaCl2 0.14 MgSO4•7H2O 0.20 Na2HPO4 0.06 KH2PO4 0.06 NaHCO3 0.35
医学进传学实验于帮 葡萄糖 1.00 酚红 0.02 二、记录和检查回报表 表！染色体病编例检查分析记景 送检材料： 检查目的： 送检时何创： 编 号 送检者： 院 科 医生 恋者姓名： 性 别： 年龄： 临床检查摘受于临床初步诊新： 家系资料： 13 中国医科大学医学通传学教研室
医学遗传学实验手册 13 中国医科大学医学遗传学教研室 葡萄糖 1.00 酚红 0.02 二、记录和检查回报表 表 1 染色体病病例检查分析记录 送检材料： 检查目的： 送检时间： 编 号： 送 检 者： 院 科 医生 患者姓名： 性 别： 年 龄： 临床检查摘要于临床初步诊断： 家系资料：
医季波传节实验于思 表2染色体检查记录 (记录内容：显微镜号，标本号，座标，核型与异常特点) 2 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 37 37 38 39 40 41 12 43 4 45 46 47 48 48 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 解 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 B5 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 14 中国医科大学医学进传学教研室
医学遗传学实验手册 14 中国医科大学医学遗传学教研室 表 2 染色体检查记录 （记录内容：显微镜号、标本号、座标、核型与异常特点） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 37 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 48 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100
医学遗传学实验于厢 表3染色体骑变分析记求 或片号 性别号 座标 核型 畸变染色体特点 照片编号 讨论： 分析结果： 分析者： 年月日 15 中国医料大学医学遭传学教研室
医学遗传学实验手册 15 中国医科大学医学遗传学教研室 表 3 染色体畸变分析记录 玻片号 性别号 座 标 核 型 畸变染色体特点 照片编号 讨 论： 分析结果： 分析者： 年 月 日